❶ 常用的核酸分子标志物有哪些
1. 放射性核素标记物是当前使用最频繁的探针标记物。这些探针的灵敏度极高,能够检测到10^-14至10^-18克的物质,在最优条件下甚至能测量到样品中少于1000个核酸分子。在Southern印迹杂交中,通常使用^32P作为标记核素,而不同的标记技术需要选择合适的核素标记方向:大多数标记方法需要的是α-^32P,而^5'末端标记则必须使用γ-^32P。
2. 非放射性标记物是科学家们多年来寻找的安全、可靠且灵敏的替代放射性核素的物质。这些标记物已经在国内外逐步推广使用,其优势在于无放射性污染,可以长期储存,更适合于临床诊断等应用。然而,这些标记物的灵敏度和特异性仍有待提高。根据检测方法的不同,非放射性标记物可以分为四类:
(1) 半抗原:如生物素(biotin)和地高辛(DIG),它们可以与特定抗体结合,通过显色反应来检测杂交信号。这两种物质是目前广泛使用的非核素标记物。
(2) 配体:生物素不仅是半抗原,还可以与亲和素结合用于检测杂交信号。
(3) 荧光素:例如FITC和罗丹明类,它们能够发出紫色荧光供观察使用,主要适用于细胞原位杂交。
(4) 化学发光探针:某些标记物能够与特定物质反应产生化学发光,类似于核素,可以直接使X线胶片上的乳胶颗粒感光。化学发光探针可能是未来非核素标记物研究的主要趋势。