‘壹’ PCR技术中不需要用DNA限制性内切酶吗
PCR(聚合酶链式反粗槐如应)是利用DNA在体外95度时解旋,35度时引物与单链按碱基互补配对结合,再调明伏温度至65度左右DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成岩启互补链.
简单的说PCR就是人工控制的生物体外DNA复制,可大量复制特定的DNA片段.其中用到DNA解旋酶,DNA聚合酶.
限制性内切酶是在基因工程中用到的,它与DNA连接酶的使用目的都是将DNA分子与运载体结合.
‘贰’ 用PCR技术从DNA中分离并克隆基因需要限制酶进行预处理吗,为什么
不需要。
因为部分克隆基因过过程中,在裤碰PCR引物设计拍和的时候已经添加了酶切位点。PCR产物就不用限制酶再酶切处胡贺谈理了。
‘叁’ 目的基因与载体结合需要ATP吗,那用PCR技术扩增时需要吗
答案是否定的!酶用的准确就行了。PCR 是扩增DNA的,需要四氏禅种dNTP以及引物扮纤DNA,只要环境温度达到一厅核仿定条件就行,所以也不需要。酶切质粒是切开一个切口,然后才将需要表达的DNA 片断加入质粒中。