1. PCR技术的原理
PCR技术原理是:先将含有所需扩增分析序列的靶DNA双链经热变性处理解开为两个寡聚核苷酸单链,然后加入一对根据已知DNA序列由人工合成的与所扩增的DNA两端邻近序列互补的寡聚核苷酸片段作为引物,即左右引物。
此引物范围就在包括所欲扩增的DNA片段,一般需20-30个碱基对,过少则难保持与DNA单链的结合。引物与互补DNA结合后,以靶DNA单链为模板,经反链杂交复性(退火)。
在TaqDNA聚合酶的作用下以4种三磷酸脱氧核苷(dNTP)为原料按5'到3'方向将引物延伸、自动合成新的DNA链、使DNA重新复制成双链。然后又开始第二次循环扩增。
(1)pcr技术用什么原理扩展阅读:
PCR技术由Cetus公司和加利福尼亚大学1985年联合创造的,主要贡献者为KaryBmulis和HeneryA、Erlich。该方法首先被应用于人β-珠蛋白DNA的扩增及镰刀状红细胞贫血病的产前诊断。
自85年首次报道PCR方法以来,PCR被广泛应用于分子克隆、序列分析、基因突变、遗传病、传染病、性传播性疾病及法医判定和考古研究等多领域、并发挥了越来越大的作用。因而发明人KaryB、mulis获1993年诺贝尔化学奖。
2. pcr原理是什么
PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。
双链DNA在多种酶的作用下可以变性解旋成单链,在DNA聚合酶的参与下,根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子拷贝。
在实验中发现,DNA在高温时也可以发生变性解链,当温度降低后又可以复性成为双链。因此,通过温度变化控制DNA的变性和复性,加入设计引物,DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。
(2)pcr技术用什么原理扩展阅读:
PCR产物的生成量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12)量级的起始待测模板扩增到微克(μg=-6)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU;在细菌学中最小检出率为3个细菌。
引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及TaqDNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行。
结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
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4. pcr技术的原理是什么
PCR技术的基本原理类似于DNA天然复制的一个过程,pcr技术的特异性主要是依赖于与靶序列的寡核苷酸引物。PCR技术其实是一种体外的DNA 产生扩增的技术,是在模板DNA、引物和4种脱氧核苷酸存在的条件下,依赖于DNA聚合酶的酶促合反应,将需要被扩增的DNA片段与其两侧互补的寡核苷酸链引物经过一系列反应的多次循环,然后使DNA的片段在数量上可以增加,从而就可以在较短的时间内获得我们所需的特定的基因片段。
(4)pcr技术用什么原理扩展阅读:
Pcr技术具有特异性强、灵敏度高、简便快速、纯度要求低等特点。PCR产物的生成量是以指数方式增加的,PCR的灵敏度可达3个RFU;在细菌学中最小检出率为3个细菌。PCR反应用耐高温的聚合酶,一般在2-4 小时就可以完成扩增反应。而且不需要分离病毒或者是细菌及培养细胞等过程,DNA的粗制品以及RNA均可以作为扩增的模板。而且可直接用临床的标本如血液、洗嗽液、毛发、活组织等DNA的扩增检测。