Ⅰ 超薄切片技术操作过程是什么
观察病毒在细胞组织内的状态,可采取超薄切片技术,将标本用固定液固定后,经过脱水渗透包埋聚合切片等过程,切成薄片然后染色检镜。
(1)固定。
常用的固定液主要有锇酸固定液、醛固定液、高锰酸盐固定液等。
①锇酸固定液:这是最常用的固定液,作用迅速,新鲜的锇酸呈浅黄色,其蒸气极毒,使用时应在强通风柜中把装有锇酸的安瓿瓶在缓冲液内敲碎。
②醛固定液:植物材料具有厚壁,锇酸固定液不能很好渗透,有时固定得不好。而醛固定液往往可获得较好效果,同时还不会破坏酶的活性,可以在切片上进行组织化学测定。常用的有甲醛固定液和戊二醛固定液。
③高锰酸盐固定液:此种固定液可保持膜的结构,但破坏核糖体并失去酶的活性,对维持TMV粒子在细胞内的排列比戊二醛及锇酸固定液好。
缓冲液可用1%液体锇酸和1%过锰酸钾,也可用磷酸盐巴比妥-醋酸和二甲胂酸盐缓冲液。固定可在0~5℃或室温下进行,供试材料尽可能使用幼嫩的植株,小的根可整个固定,叶片需剪成1~2cm的小块。叶中的空气会阻止固定液与大部分细胞接触,可在真空下把空气除去。
组织固定后必须彻底冲洗,在进行锇酸固定前要把多余的醛用缓冲液冲洗彻底。固定后的组织一定要进行脱水,特别是采取不溶于水的树脂包埋时,在室温低于4℃时,丙酮或乙醇脱水效果都很好。
(2)包埋。
包埋用的树脂可分为四类,即甲基丙烯酸酯、环氧树脂、聚酯树脂和各种水溶性化合物。
甲基丙烯酸酯在聚合过程中可能引起组织损伤,在电子束轰击下,这种介质有升华的趋向,引起细微组织结构的破坏。但甲基丙烯酸酯也有优点,它比环氧树脂能切出较大的切块切面,切片也容易染色。
环氧树脂和聚酯树脂是保存细胞细微结构的最好包埋材料,目前最常用的环氧树脂是Epon和Araldite,用它包埋的标本可避免聚合损伤,树脂切片在电镜下不升华,可使标本连续观察,并保存细微结构。
水溶性树脂剂对一些不希望用有机溶剂脱水,或利用组织切片做酶外处理试验特别有用,其缺点是不能很好地保持细胞的细微结构。
组织需在包埋介质中充分渗透,常用的有两种方法:
①环氧树脂包埋组织的渗透。将丙醇脱水的组织转到装有6ml由等量丙酮和环氧树脂的标本管中,将标本管放在烤箱内由倾斜45°角的马达带动的轮上,使其不断转动,丙酮由开口的管中蒸发,当丙酮味消失后,将组织在擦镜纸上吸干,浸入新鲜的树脂中,再于同一温度下放4h,再一次吸干组织后,移到装有新鲜树脂的胶囊内,将Epon块放在40℃下,直至完全变硬,并继续在60℃下凝固12h。
②水溶性树脂包埋组织的渗透。将组织在戊二醛中固定,在缓冲剂中冲洗1~12h,然后在80%GMA单体和20%的水中脱水20min,再于97%GMA单体和3%的水中继续脱水20min后,在制备的聚合混合物中渗透过夜。将组织放在烘炉内的明胶胶囊中,注满聚合混合物除去所有空气泡,盖好使其不使与空气接触,把胶囊用金属丝垂直吊起,用长波长的紫外光聚合1~3d即可。
(3)切片。
切片前切去埋块四周的树脂,留下高2~3mm的标本正方柱,装入切片机,使埋块面的平行边与刀口平行,把刀慢慢向标本推进,通过切片机上的目镜系统,把刀推到看不到有间隙之处,每次推进0.5~1.0μm,直到切下切片。切片厚度以能达到浮于液面的切片呈灰色为最好。切片可用醋酸双氧铀和柠檬酸铅进行染色。染色后的切片在0.1N氢氧化钠中冲洗,然后用水冲洗。
Ⅱ 简述PCR技术操作步骤
PCR即聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction)的缩写,它是体外酶促合成特异DNA片段的方法。这一方法的要点是合成两个分别互补于待扩增DNA片段两端的小片段引物,在含有引物、待扩增DNA模板核苷酸底物和DNA多聚酶的反应体系中DNA复制反复进行,在短时间内可以取得大量扩增产物。其原理是寡聚核苷酸链引物在DNA聚合酶的作用下沿模板延伸,合成两个与靶DNA两侧序列互补的引物,在体外进行靶DNA的重复合成。
主要的技术步骤是:
(1)DNA变性 加热使靶DNA序列双链解离成单链DNA。
(2)引物与靶DNA退火 适当降低温度,使两个引物分别结合成靶DNA两条的3′末端向5′末端延伸。
(3)引物延伸 在DNA聚合酶的催化下,引物沿着靶DNA3′末端向5′末端延伸。新合成的DNA链在变性解离后,又可作为模板与引物杂交,并且在DNA聚合酶的催化下,引导合成新的靶DNA链。如此反复进行以上3个步骤,即可使靶DNA片段指数性扩增。
Ⅲ 50项护理操作技术有哪些
1、手卫生技术(一般洗手法)。
2、无菌技术。
3、生命体征监测技术。
4、口腔护理技术春漏谈。
5、鼻饲护理技术。
6、留置导尿管技术。
7、胃肠减压技术。
8、大量不保留灌肠技术。
9、氧气吸入(氧气筒供氧)技术搜庆。
10、氧气吸入(中心供氧)技术。
11、换药技术。
12、氧气驱动雾化吸入技术。
13、快速血糖监测技术。
14、口服给药技术。
15、密闭式周围静脉输液技术。
16、密闭式周围静脉输血技术。
17、BDY型密闭式防针刺伤型安全留置针。
18、静脉注射技术。
19、PICC技术。
20、动脉采血技术。
21、肌内注射技术。
22、皮内注射法(青霉素过敏试验)技术。
23、皮下注射技术。
24、物理降温技术。
25、单人心肺复苏技术。
26、经鼻或口腔吸痰技术操作评分标准。
27、经气管插管/气管切开患者吸痰技术。
28、心电监护仪的使用技术。
29、人工呼吸机应用技术。
30、微量注射泵使用技术。
30、异步心脏电除颤术。
31、轴线翻身技术。
32、患者搬运法(协助患者移向床头)。
33、患者约束技术。
34、痰标本采集技术。
35、咽拭子培养标本采集技术。
36、电动洗胃技术。
37、“T”管引流技术。
38、造口护理技术。
39、膀胱冲洗技术。
40、脑室管引流技术。
41、胸腔闭式引流技术。
42、会阴消毒技术。
43、新生儿暖箱应用技术。
44、光照疗法。
45、新生儿脐部护理技术。
46、听胎心音技术。
47、患者入院护理。
48、患者出院护理。
49、预防患者跌倒。
50、压疮的预防及护理技术。
(3)什么的操作技术扩展阅读:
职业要求
护理专业中专以上学历,取得护士执业资格。
护士被称作天使的职业,它需要有爱心、细心、责任扒碰心以及耐心,一名优秀的护士不仅需要了解诊疗护理常规,熟练掌握护理三级操作技能;而且要有很强的亲和力、沟通能力以及语言表达能力。具有高度的责任心、良好的职业道德、严谨的工作态度、较强的综合分析能力,敏锐的洞察力。
按照《护士条例》规定,凡符合以下条件之一,并在教学、综合医院完成8个月以上护理临床实习的毕业生(包括应届毕业生),可报名参加护士执业资格考试,获得省级以上教育和卫生主管部门认可的普通全日制中等学校护理、助产专业学历,担任护士职务满5年。
获得省级以上教育和卫生主管部门认可的普通全日制高等学校护理、助产专科学历,从事本专业工作满3年;获得国务院教育主管部门认可的普通全日制高等学校护理、助产专业本科以上学历,从事本专业工作满1年。
考生的报名资格由省级卫生行政部门负责审核,考试合格者由卫生部人才交流服务中心发给考试成绩合格证明,作为申请护士执业注册的有效证明。