❶ 双分子荧光互补的BiFC技术缘起
目前,BiFC系统不仅可以直观地检测到1对蛋白质在体内或体外的相互作用,也可以由不同颜色的BiFC系统在同1个细胞中共用实现多组蛋白质相互作用的同时检测。2008年,Shyu等又将BiFC技术和FRET技术结合起来,建立了基于双分子荧光互补的荧光共振能量转移技术(BiFC-FRET),BiFC2FRET采用了青色的荧光蛋白cerulean和1个黄色的基于venus的BiFC系统联用,能同时检测3个蛋白之间的相互作用。其做法是,将bJun和bFos分别和venus荧光蛋白的N,C端片段相连,bJun和bFos的相互作用使得venus蛋白重建;当和cerulean融合的蛋白NFAT1和bJun和bFos异源二聚体相互作用时,cerulean可以作为供体将能量共振转移至重建后的venus荧光蛋白,实现3个蛋白质相互作用的共检测。