什么叫做微生物保藏技术

‘壹’ Help ! 微生物学中菌种的保存原理是什么

看情况了
一般而言微生物菌种的保藏就是尽量使得微生物的代谢缓慢进行，防亏厅止出现性能或者机体能力的退变销源隐，要达到这个目的，我们可以根据不同微生物的种类进行设计。产芽孢的菌使用芽孢进行保藏，因为芽孢具有极佳的抗逆性。不产芽孢的菌种我们选择处于对数生长期的菌种进行传代保藏（因为处于对数期的菌种比较容易接受新环境，与所必须的生长因子等有关）。
额外说一句，我个人认为：无论是什么样的保藏方法，我们都不能绝对保证菌种的特性和保藏前一模一样，保藏时间越长越容易出问题。裂吵

‘贰’ 常用的菌种保存方法有哪些

菌种保藏是食用菌产业的一项基础工作，是确保野生种质资源基因留存和现有生产用种遗传性能相对稳定的必要手段。菌种保藏的方法多种多样，有的虽然保藏效果好，但投资高或操作繁杂。在生产实践中，更需要设备投入少，能保障菌种不死亡、不污染、最大限度地保持优良种性的简便方法，如斜面低温短期保藏和自然基质较长期保藏相结合的方法。

一般而言，对母种进行长期保升毁存，对原种进此宴行短期保存。须保证优良菌种的性状和活力不发生变异，不死亡，不被污染，确保其纯度。因此，保存方法应具备取材容易、操作方便、菌种不易退化、长期保存不污染杂菌等优点。常用的菌种保存方法如下：

（一）斜面低温保藏 该法的优点是保藏方便且所占空间较小。具体做法是：菌丝长满斜面后，放在0～5℃保存。以后每隔一定时间（2～3个月）转管一次。转管保存不能长期用PDA培养基，否则种性易退化，灰树花降解木质纤维素的能力减弱。因此隔一定时间（1年左右）须把菌种转接到木屑培养基上复壮，之后挑选健壮无污染的菌丝再转回PDA培养基保存。在长期保存过程中，要防棉塞受潮滋生杂菌。菌种试管口最好用蜡烫封，以防培养基内水分过快蒸发。增加琼脂用量（2.5%～3%）可减缓水分蒸发。还要防止菌种管上的标签脱落而造成种系混杂。

斜面低温保藏方法简便易行，能随时观察保藏菌株的活力和纯度，一旦染杂，肉眼能及时发现。

（二）自然基质保藏 此法是根据灰树花的特性，利用自然基质保藏其菌种的方法。灰树花是木腐菌，可以采用以木屑为主料的培养基。自然基质营养全面，且大部为缓释养分，不易产生营养过剩或饥饿；其次，培养基理化性状好，可吸收或缓冲菌丝代谢出的有害物质，水分与通气协调平衡，部分菌丝扎入基质内生长，不裸露于空气中，菌丝呼吸强度低，生命力强。

1.原料与配方 粗、细木屑比例适当，采用板栗树木屑最佳，粗木屑粒径为2毫米左右，细木屑为一般圆盘锯屑，粗、细的比例为1∶2，添加吵扒备干木屑重量20%的麸皮和1%的糖，含水率为60%左右。这样的基质通气性好，营养丰富且供菌丝分解利用的时间长，长到基质内部的菌丝比包裹在基质外部暴露于空气中的菌丝耐受性强。不同粒径的基质比例适当，还能协调气与水的矛盾。粗粒过多，架空菌丝多；细粒过多，透气性差，菌丝生长慢。应用配方如下：

栗木屑78%，麸皮20%，石膏1%，蔗糖1%，水65%配料，装入较粗大的试管中，装料量为试管的1/3～1/2，1.5千克/厘米2灭菌1.5小时。冷却后，接入需保藏的菌种，在28℃下培养，待菌丝长满木屑培养基时取出换上无菌橡皮塞，在0～5℃冰箱内保藏1～2年转管一次。

2.容器与装量 采用容量250毫升的葡萄糖玻璃瓶，清洗洁净，装量一般不超过玻璃瓶容量的3/5，填料不能过满，瓶壁所残留的颗粒须擦拭干净，否则保藏的菌种易引起污染。

3.灭菌和冷藏 灭菌时若采用棉塞封口，基质表层易失水，接种成活率低，即使菌丝复活，生长也很缓慢，所以最好采用聚丙烯膜封口，接种后换用无菌棉塞培养，待菌丝长满后再换成有孔灭菌胶塞冰箱保藏。

用上述方法保藏的菌种经3年贮放后，接出成活率均达90%以上，出菇验证产量及子实体形态特征均无明显变化。因此，自然基质保藏法具有保存期长，菌种遗传性能相对稳定的特点。

（三）木粒PDA斜面保藏 灰树花在自然状态下易发生于栗树根部，这说明其营养需求较为特殊。根据灰树花这种习性，在PDA基础上添加适量的栗树木粒制成母种培养基。在多年的使用中发现，用该培养基培养的母种生长势好，在转接原种时，适应能力强，萌发定植快；用作菌种保藏基质时，保藏时间长，并能很好保持菌种的优良性状。

1.木粒PDA的制作 选取栗树边材，加工成0.3～0.5厘米的颗粒，及时烘干或晒干备用。称取葡萄糖10克，KH2PO41克，1溶解于1升清水中配制成营养液。将营养液倒入盛有木粒的小铝锅中，营养液以完全浸没木粒为准。煮沸10分钟，以加快木粒对营养液的吸收速度，起锅静置30分钟让木粒吸足营养液。捞出木粒，沥掉表面的水，装入试管，装量为试管长的1/6，最多不得超过试管长的1/5，否则在摆制斜面时，不易使木粒均匀分散于斜面的表面上。

选取新鲜的马铃薯，去皮并切成薄片，称取200克放入小铝锅中，加入1升清水，文火煮沸30分，趁热过滤取汁，并补足1升的体积。称取琼脂20克，葡萄糖20克，KH2PO4 2克，MgSO47H2O 2克。先将琼脂剪碎，加入到马铃薯滤液中，继续用文火加热，使琼脂溶化。待琼脂完全溶化后，加入称好的其他3种营养成分，搅拌使这些物质溶解均匀，趁热装入已装有木粒的试管中，装至试管长的1/3处，塞上棉塞。

在0.8～1千克/厘米2蒸气压下灭菌40分，待气压降至0时，开盖取出，趁热轻轻抖拍试管，使木粒分散后即可摆制斜面，并使木粒呈半裸状分布于斜面上，待凝固后便制成了木粒PDA培养基。

2.生长及保藏效果 木粒PDA斜面上培养的灰树花母种，菌丝生长迅速、良好，12天即可长满试管，但菌丝的后期生长势更为粗壮、浓密，后劲足。转接原种时，菌种适应力强，定植快。这表明，灰树花菌丝的生长速度、生长势不仅取决于本身的遗传性，而且很大程度上取决于培养基的营养。常规PDA的营养成分，主要是可溶性的速效性营养，前期营养丰富，营养利用直接，因而前期菌丝生长迅速、良好，后期营养则不足，菌丝生长不良，长势欠佳。木粒PDA由于在增添了木粒这一缓效性营养，就木腐性的灰树花而言，营养配伍合理，补充了菌丝生长后期所需的营养，因此后劲足。

菌丝体对基质的分解利用是通过菌丝细胞分泌的胞外酶，将基质中的大分子营养分解成小分子营养后才被吸收利用的，而这些胞外酶大多为诱导酶，其合成与分泌受基质的诱导和分解产物阻遏机制调节。就纤维素酶而论，许多易代谢碳源（如葡萄糖等）具有引起酶合成阻遏作用，同时伴随着菌丝体的旺盛生长，酶的大量合成则出现在易代谢碳源基本耗尽之后，且受到基质纤维素的诱导，常规PDA基质，到葡萄糖等易代谢碳源基本耗尽的后期，由于营养的缺乏，菌丝生理机能下降，酶的合成量减少。而木粒PDA不仅含有易代谢碳源——葡萄糖，又含有木粒这一缓效性营养，前期葡萄糖促进了菌丝体旺盛生长，获取了大量的菌丝体，表现为菌丝粗壮、浓密。到了易代谢碳源耗尽的后期，木粒一方面补充了后期所需的营养，使菌丝的生埋机能维持在一定的水平；另一方面木粒的纤维素激活菌丝细胞纤维素酶的诱导机制，合成了大量的酶，保持了木腐生性灰树花较强的分解木材的能力，因此，用该培养基培养的母种在转接原种时适应力强，萌发定植快。因部分菌丝长入木粒内部，抵抗不良环境的生存能力增强，种质不易退化。木粒PDA灰树花菌种，在0～5℃保藏2～3年再转管活化，成活率仍达到90%左右。此外，木粒PDA应用于木腐性灰树花种的提纯复壮，效果也较理想。

（四）石蜡隔氧封藏 具体做法是将液态石蜡分装入三角瓶内，装量达瓶空间的1/3，塞好棉塞，于121℃灭菌2小时，然后置40℃温箱中，使其水分蒸发，或置于干燥器内数日以除去水分，石蜡呈透明状为宜。在无菌条件下，用无菌吸管装入已长好菌丝的斜面试管，使液面高出斜面顶部1厘米左右。塞上无菌橡皮塞，竖直保存。此法可使菌种存活3年以上，但以1～2年移植一次为好。移植时不必倒出石蜡，用接种钩取一块菌丝即可。因转移时带有石蜡，菌丝生长弱，需要再转管1～2次，方能复壮。

‘叁’ 保藏菌种的方法有哪些

1、传代培养保藏法：包括卖凳又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等，培养后于4-6℃冰箱内保存。

2、液体石蜡覆盖保藏法：液体石蜡覆盖保藏法是传代培养的变相方法，能够适当延长保藏时间。

3、载体保藏法：载体保藏法是将微生物吸附在适当的载体，如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干燥的保藏法。

4、寄主保藏法：寄主保藏法用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物。

5、冷冻干燥保藏法：先使微生物在极低温度（-70℃左右）下快速冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分（真空干燥），其中真空冷冻干燥法最中正旅常见。

(3)什么叫做微生物保藏技术扩展阅读

菌种保藏的原理：

菌种保藏有多种方法，其原理大多大同小异，主要是运用一些方式尽量降低生物体内的代谢，达到延长生命，减少变异的目的。通常采用的方法为低温、缺氧、干燥。

低温主要对菌种产生两方面的影响，首先，较低的温度可以减缓机体细胞的酶活，降低新陈代谢，达到保藏菌种的目的。其次，低温同时会导致菌体诱发菌丝自溶机制，如果降温过程失误，同样会造成机体的清凳机械损伤和溶质损伤。

‘肆’ 微生物菌种保藏的方法有哪些

菌种的优劣是食用菌生产成败的关键。菌种是国家重要的生物资源，也是微生物工厂首要的生产资料。由于微生物繁殖快、易变异，因此微生物菌种特别需要妥善保藏。世界各国对微生物菌种都很重视。中国科学院微生物研究所专门设立了菌种的保藏机构，为各生产单位收藏和供应各种优良菌种。当然就具体的生产单位而言，大量的生产用菌种还得靠自己来生产和保藏。
菌种保藏的目的：是使优良菌种经过较长时间后，仍能保持菌种的优良性状、生活能力及纯度，降低菌种的衰亡速度，确保菌种的纯一，防止杂菌污染及绝种。
保藏菌种的方法：人们在长期的生产实践中，积累了不少保藏菌种的经验，常用的保藏方法有：斜面低温保藏法、液体石蜡保藏法、砂土管保藏法、滤纸片保藏法、谷粒保纤含毕藏法等。常用保藏菌种的方法有以下几种：
（1）斜面低温保藏法这是最简单最普通的保藏方法。首先将菌种在适宜的斜面培养基（一般PDA）上培养成熟后，选择菌丝生长粗壮，边缘保存。一般保存温度4～6℃，除草菇和银耳菌种外（10～15℃），此方法对其他食用菌都适宜，一般菌种可保藏2～4个月，所以需定时移接。此法保藏虽然方便，但是保藏时间短，需经常转管，也很容易发生衰退变异现象。因此，不能用作长期保藏，最好与其他方法结合起来保藏。
另外，为了减少保藏期间培养基水分蒸发，琼脂最好加到2.5%。为防止菌种在保藏过程中产酸分的积累，应加入0.2%的磷酸氢二钾、磷酸二氢钾等缓冲盐类，同老汪时，培养成熟后，最好将棉塞管口外剪平，并用矿蜡封或换以无菌木塞，这样做也可以减少培养基水分的散失，延长保存时间。
在毁芹农村如果没有冰箱，可采用土法保藏。即把保藏用的斜面菌种换上无菌橡皮塞，并用矿烛蜡封后密闭的广口瓶中，悬入井底保藏。（2）贮藏室保藏法原种和栽培种一般只在贮藏室短期保藏，贮藏室温度0～10℃为好。室内应清洁、干燥、无光，应经常检查温度和湿度，以降低其生活力，减少变异退化，防止杂菌污染，避免过早出菇。温度越高，保存的时间越短。

‘伍’ 什么是微生物菌种保藏

保藏御誉方法

1．传代培养保藏法

又有斜面枯手培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等（后者作保藏厌氧细菌用），培养后于4—6℃冰箱内保存。

2．液体石蜡覆盖保藏法

是传代培养的变相方法，能够适当延长保藏时间，它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡，一方面可防止因培养基水分蒸发而引起镇败段菌种死亡，另一方面可阻止氧气进入，以减弱代谢作用。

3．载体保藏法

是将微生物吸附在适当的载体，如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。

4．寄主保藏法

用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物，如病毒、、螺旋体等，它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代，此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。

5．冷冻保藏法

可分低温冰箱（-20—-30℃，-50—-80℃）、干冰酒精快速冻结（约-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法。

6．冷冻干燥保藏法

先使微生物在极低温度（-70℃左右）下快速冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分（真空干燥）。

‘陆’ 四大微生物最适合的保藏方法是什么

找了半天~~~给个最佳呗

1、低温定期移植保藏法。将需要保藏的菌种接种在适宜的斜面培养基上，适温培养，当菌丝健壮地长满斜面时取出，放在3-5℃低温干燥处或4℃冰箱、冰柜中保藏，每隔4-6个月时间移植转管一次，具体应根据菌种特性决定。保藏时要注意环境温度不能太高，以防霉菌通过棉塞进入管内。因此，若用棉塞，可用干净的硫酸纸或牛皮纸包扎棉塞，即可减少污染的机会，也可防止培养基干燥。除草菇菌种外，其他食用菌菌种都能采用此法保藏。

2、液体石蜡保藏法。取化学纯液体石蜡(要求不含水分、不霉变)装于三角瓶中加棉塞并包纸，在1公斤/平方厘米压力下灭菌1小时，再放入40℃恒温箱中数天，以蒸发其中水分，至石蜡油完全透明为止。将处理好的石蜡油移接在空白斜面上，28-30℃下培养2-3天，证明无杂菌生长方可使用。然后用无菌操作的方法把液体石蜡注入待保藏的斜面试管中。注入量以高出培养基斜面1-1.5厘米，塞上橡皮塞，用固体石蜡封口，直立于低温干燥处保藏。保藏时间在一年以上，在低温下，保藏时间还可延长。

3、沙土管保藏法。取河沙用水浸泡洗涤数次，过60目筛除去粗粒，再用10%盐酸浸泡2-4小时竖族携，除去其中有机物质，再用水冲洗至流水的ph达到中性，余伏烘干备用。同时取贫脊土或菜园土用水浸泡，使呈中性，沉淀后弃去上清液，烘干碾细，用100目筛子过筛，将处理好的沙与土以(2-4):1混匀，用磁铁吸出其中的铁质，然后分装小试管或安瓿内，每管装量0.5-2克，塞棉塞，用纸包扎灭菌(1.5公斤/平方厘米，1小时)，再干热灭菌(160℃，2-3小时)1-2次，进行无菌检验，合格后使用。将已形成孢子的斜面菌种，在无菌条件下注入无菌水3-5毫升，刮菌苔，制成菌悬液，再用无菌吸管吸取菌液滴入砂土管中，以浸透砂土为止。将接种后的沙土管放入盛有干燥剂的真空干燥器内，接上真空泵抽气数小时，至沙土干燥为止。真空干燥操作需在孢子接入后48小时内完成，以免孢子发芽。制备好的沙土管用石蜡封口，在低温下可保藏2-10年。

4、滤纸片保藏法。取白色(收集深色孢子)或穗亏黑色(收集白色孢子)滤纸，剪成4×0.8厘米的小纸条，平铺在培养皿中用纸包裹进行灭菌(1公斤/平方厘米，30分钟)。采用钩悬法收集孢子，让孢子落在滤纸条上。将载有孢子的滤纸条放入保藏试管中，再将保藏试管放入干燥器中1-2天，除去滤纸水分，使滤纸水分含量达2%左右，然后

‘柒’ 菌种保藏的目的，菌种保藏的方法有哪些

1、目的：尽可能的保持菌种的原有性状以及活力的稳定，保证菌种不死亡、不发生变异、不被外物污染，保持菌株的优良性状不发生退化以及优良菌株的存活。2、原理：通过降低微生物体内的代谢，抑制生长繁殖，从而延长菌种的生命，减少变异，常用的方法为低温保藏、缺氧保藏、干燥保藏。

一、菌种保藏的目的

1、目的

在使用和传代的过程中，菌种容易出现污染，发生变异，死亡等情况，从而导致菌种衰退，优良菌种丢失。而菌种保藏的目的就是为了尽可能的保持菌种的原有性状以及活力的稳定，保证菌种不死亡、不发生变异、不会被外物污染，保持菌株的优良性状不发生退化以及优良菌株的存活。

2、原理

菌种保藏的原理是通过降低微生物体内的代谢，抑制生长繁殖，从而延长菌种的生命，减少变异。常用的方法主要为低温保藏，缺氧保藏，干燥保藏。除此之外，避光，添加保护剂，缺乏营养等也可以提高保藏的效果。

二、菌种保藏的方法有哪些

1、斜面低温保藏法

将菌种接种到适合的固体斜面培养基上，等到菌种充分生长过后，使用油纸将棉塞部分包扎好，然后转移至2-8℃的冰箱中进行保存。

2、液体石蜡保藏法

（1）使用三角烧瓶将液体石蜡装好，塞上棉塞，并用牛皮纸进行包扎，0.1MPa，121.3℃灭菌30分钟左右，然后转移至40℃的温箱中，将水汽蒸发掉。

（2）将菌种在斜面培养基中培养，得到健壮的菌体，然后使用灭菌吸管将石蜡注入斜面上，用量为高出斜面顶端1cm为宜。

（3）将试管直立，放置在低温或者室温的环境下进行保存。

3、滤纸保藏法

（1）准备好滤纸条（0.5×1.2cm），装入安瓿管中（0.6×8cm），每个管中放入1-2张，然后塞上棉塞，在0.1MPa，121.3℃的环境下灭菌30分钟。

（2）将菌种在斜面培养基中培养，得到健壮的菌体，然后取出1-2ml的灭菌脱脂牛乳，滴加在灭菌培养皿内，接着取数环菌苔在牛乳内混合均匀，制成浓悬液。

（3）使用镊子将滤纸条夹出，浸入菌悬液内，吸饱后，放回安瓿管中，塞上棉塞。

（4）将安瓿管放入装有五氧化二磷的干燥器，并用真空冲慎泵抽气至干，然后将棉花塞入管内，用火焰熔封，放置在低温下保存。

（5）当需要使用菌种的时候，将安瓿管口在火焰上烧热，在烧热的部位滴上一滴冷水，使玻璃破裂，再用镊子将瓶口端的玻璃敲掉，等到打开安瓿管后，将滤纸取出，放入液体培养基内，置温箱中培养。

4、沙土保藏法

（1）取出河沙，加入10%稀盐酸，加热煮沸30分钟（除去有机质）。

（2）将酸水倒掉，并用自来水将河沙洗至中性，然后进行烘干，过筛（40目筛子），将粗颗粒去掉。

（3）取非耕作层的不含腐植质的瘦黄土或红土，浸泡洗涤数次，直至为中性。

（4）烘干，碾碎，过筛（100目筛子），去除粗颗粒。

（5）将沙和土按照2：1的比例混合，装入试管中，塞好棉塞，灭菌配并30分钟左右。

（6）将菌种在斜面培养基中培养，得到健壮的菌体，然后向斜面培养物中注入3-5ml无菌水，洗下细胞或孢子制成菌悬液。

（7）用无菌吸散卖敬管吸取菌悬液，均匀滴入沙土管中，每管0.2-0.5ml，然后真空抽去管中的水分。如果是放线菌和霉菌可以直接挑取孢子拌入沙土管之中。

（8）将沙土管用火焰熔封，然后放置在低温（4-6℃）干燥处保藏，或者是将沙土管直接用牛皮纸或塑料纸包好，置干燥器内保存。保存过程中，需要每隔半年检查一次菌种的存活性和纯度。

5、甘油管保存法

（1）将80%的甘油进行高压蒸汽灭菌。

（2）将菌种放置在斜面培养基上培养，然后使用无菌水制成高浓度的菌悬液。

（3）使用1ml的甘油与菌液混合均匀，让甘油的浓度为10-30%左右，然后将其放置在零下70℃的环境下进行冻存。

（4）也可以使用甘油-生理盐水（体积比8：2），和菌体肉汤混合均匀，然后放置在零下20℃的环境下进行保存。

6、冷冻干燥保藏法

（1）在低温下将细胞快速冻结，然后在真空条件下进行干燥，同时为了保证细胞在冷冻和水分升华的过程中不受损害，应当使用保护剂来制备细胞细胞悬液（菌在冻结和脱水过程中起到保护作用的溶质），通过氢键和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。

（2）干燥后的菌种在真空下封装，和空气隔绝，从而实现长期保藏。

（3）该方法兼具低温、干燥、除氧三方面菌种保藏的主要因素，除开丝状真菌的菌丝体外，其它各类微生物大多都适用。

‘捌’ 菌种保藏的原理，菌种保藏方法

1、菌种保藏的原理：菌种保藏有多种方法，其原理大多大同小异，主要是人为创造条件尽量降低生物体内的代谢活动，以达到延长生命、减少变异的目的，其中低温、干燥和隔绝空气是使微生物代谢能力降低的团慎重要因素。2、菌种保藏方法：菌种保藏常用的方法有冻干保藏法、液氮保藏法、甘油管冷冻保藏法、传代培养保藏法、寄主保藏法、载体保藏法等。

一、菌种保藏的原理

1、菌种保藏的原理是根据菌种的生理生化特性，人为创造条件尽量降低生物体内的代谢活动，以达到延长生命、减少变异的目的。在保藏过程中，必须使微生物的代谢处于最不活跃或相对静止的状态，才能在一定的时间内使其不发生变异而又保持生活能力。

2、低温、干燥和隔绝空气是使微生物代谢能力降低的重要因素，因此菌种保藏方法虽多，但都是根据这三个因素而设计的。其中低温可减缓机体细胞的酶活，降低新陈代谢，达到保藏菌种的目的，同时会导致菌体诱发菌丝自溶机制。

二、菌种保藏方法

常用的方法有冻干保藏法、液氮保藏法、甘油管冷冻保藏法、传代培养保藏法、寄主保藏法、载体保藏法等。

1、冻干保藏法

冻干保藏法是最有效的方法之一，具体为：先使微生物在极低温度（竖兆-70℃左右）下快速冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分（真空干燥），其中真空冷冻干燥法最常见。

2、液氮保藏法

液氮保藏法，又称为塌纤敬超低温保藏法，主要利用微生物在低于-130°C的低温下新陈代谢趋于停止的原理，在液氮中（-196°C的超低温下）有效地进行菌种保藏的方法。该方法一般可保藏15年以上，是公认的菌种长期保藏技术之一。

3、甘油管冷冻保藏法

甘油管冷冻保藏法，利用微生物在甘油中生长和代谢受到抑制的原理达到保藏目的。该方法适用于一般细菌的保存，同时也适用于链球菌、弧菌、真菌等需特殊方法保存的菌种，适用范围广，操作简便，效果好，无变异现象发生。

4、传代培养保藏法

传代培养保藏法，又称定期移植保藏法，包括斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等，是指将菌种接种于适宜的培养基中，最适条件下培养，待菌种生长完全后，通常置于4℃-6℃进行保存并间隔一定时间进行移植培养的菌种保藏方法。

5、寄主保藏法

寄主保藏法相当于一般微生物的传代培养保藏法，必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代，尚不能用于在人工培养基上生长的微生物，如病毒、立克次氏体、螺旋体等。

6、载体保藏法

载体保藏法，将微生物吸附在适当的载体如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。