1. 免疫磁珠细胞分选的简介
把细胞用超级顺磁性的 MACS MicroBeads (MACS微型磁珠)特异性地标记,磁性标记完后,把这些细胞通过一个放在强而稳定磁场中的分选柱。分选柱里的基质造成一个高梯度磁场。被磁性标记的细胞滞留在柱里而未被标记的细胞则流出。当分选柱移出磁场后,滞留柱内的磁性标记细胞就可以被洗脱出来,这样就完全可以获得标记和未标记的两个细胞组份。
超顺磁性的MACS MicroBeads 的体积很小,其直径约为50nm,体积约小于真核细胞的一百万份之一,可与病毒的大小相比。标记细胞上的微型磁珠即使在扫描电镜照片上也几乎看不到。磁性抗体和磁性标记物间的反应可在几分钟内完成。
由于微型磁珠的体积极小,所以不会对细胞造成机械性压力,而且使孵育时间短,操作圆悔过程快。MicroBeads 形成一个稳定的胶体液,它们在磁场中既不沉淀又不凝聚。微型磁珠的大小和它的组成成份(氧化铁和多糖)使其可被生物降解,且不会激活细胞或影响细胞的功能和活力,细胞的生理功能也不变。磁珠不需要去除,因此,阳性分选出的细胞(即磁性标记细胞)可立即用于分析和随后的实验。
用MACS 细胞分选系统可以分离举卖出非常纯的细胞群体,而且有极好的回橘答正收率和存活率。依据细胞频率和标记表达水平的不同,MACS分离细胞的纯度可达95%-99.9%,回收率>90% 。
2. 在实验中,经常提取核酸的时候有很多方法,其中磁珠法是什么意思,有什么好处
传统的核酸分离技术包含沉淀,离心等过程历孝,这些纯化方法的步骤繁杂、费时长、收率低,接触有毒试剂,很难实现自动化操作;而采用磁性载体微球分离技术就能很好地克服这些缺点,实现样品的快速、高效制备.
磁珠法提取核酸是通过细胞裂解液裂解细胞,从细胞中游离出来的核酸分子被特异的吸附到磁性颗粒表面,而蛋白质等杂质不被吸附而留在溶液中。反应一定时间之后,再在磁场作用下,慧肆使磁性颗粒与液体分开,回收颗粒(即磁珠-DNA 混合物),再用洗脱液洗脱即可以得到纯前烂轿净的DNA。
3. 免疫磁珠法可以分离Th1和Th2细胞吗
免疫磁珠法可以分离Th1和Th2细胞
(以下转载)
免疫磁珠法 (MACS):免疫磁珠法是 2O世纪 80年代出现的技术方法。1983年 Ugelstad提出将免疫磁珠用于细胞分选,1990年,Mihenyi建立了 MACS。这一方法的核心是在磁珠表面包被具免疫反应性的抗体进行抗原抗体反应,在细胞埋滚睁表面形成玫瑰花结,这些结合了磁珠的细胞一旦置于强大的磁场下,就会与其他未被结合的细胞分群,具超强顺磁场的磁珠脱离磁场后立即消失磁性,这样就可以筛选或去除所标记的细胞 ,从而达到阳性或阴性选择细胞的目的。这一技术 目前已经广泛运用于细胞备祥及分子生物学,分离基因、靶细胞及造血干细胞等。其分离效果得到了免疫荧光、PCR、FISH及 FACS等方法的确认。免疫磁珠可以有效地分选细胞,从而决定了这一方法在神经干细胞分选中应 用的技术可行性 。
CD4+亚群(Th细胞)根据自身所分泌的细胞因子,分为Th1和Th2两个亚群。Th1细胞主要分泌IL-2、IFN- γ和TNF-β 等细胞因子。Th1细胞主要介导细胞免疫反应,在诱发器官特异性自身免疫病,器官移植排斥反应和抗感染免疫中起着重要的免疫调节作用。Th2细胞主要分泌IL-4、IL-5、IL-6、IL-10和IL-13。Th2细胞主要调节体液免疫反应,在弯岁诱发过敏反应中起着决定性的作用。
4. 血小板分离纯化技术的先进分离技术
免疫磁珠分选技术
免疫磁珠分选技术(MACS)是高效简捷的血小板分离纯化方法。MACS是利用血小板表面标志CD61进行分离的。将单克隆抗CD61-PE包被在磁珠上,然后包被上单克隆抗体的磁珠与血小板特异性结合。磁珠携带着与之结合的血小板吸附于分离柱上,没有与磁珠结合的阴性细胞流出,从而实现了血小板的分离。
用MACS细胞分选系统可以分离出非常纯的血小板,纯度可以达到80%-99%,连续两次过柱分选可进一步提高血小板纯度,通常可大达95%-99%,回收率在90%以上。而且,由于微型磁珠的体积极小,其直径只有50nm,所以不会对血小板造成机械性压力,而且使孵育时间短,操作过程快。MicroBeads形成一个稳定的胶体液,它们在磁场中既不沉淀又不凝聚。微型磁珠的大和它的组成成分(氧化铁和多糖)使其可被生物降解,且不会激活细胞或影响细胞的功能和活力,细胞的生理功能也不会改变。磁珠不需要去除,因此,阳性分选出的细胞可立即用于分析和随后的实验。如果操作得当,其分离效果与流式细胞术的血小板分离效果基本处于同一水平,并还具有比流式细胞仪的分离更省时,费用低,及操作简单等优势。
流式细胞术
流式细胞分选技术是目前最先进的分离纯化技术之一。血液中的血小板在激光束的照射下发出散射光和荧光,经探测器检测,转换为电信号,经计算机处理,被确认为CD61阳性细胞,超声压电晶体通电后发生高频震动,使细胞流动室喷咀流出的液流戚携束断成一连串均匀的液滴,每秒钟形成液滴上万个,每个液滴包含着一个样品细胞。CD61阳性的血小板被充电,在通过偏转的高压静电场时向左或向右偏转被收集在指定的容器高行伏中。阴性细胞不发生偏转进入中间废液收集器中,从而实现了分选。
流式细胞仪分离细胞速度大概为4500000个带洞每小时,经分选可获得高纯度、高回收率及高活细胞率,所分离的血小板仍然可保持无菌、原有结构和生物活性。上述特点决定流式细胞术分离血小板无疑可获得最佳效果。但该方法的限制性,首先在于费用昂贵,需要流式细胞仪这样的特殊设备,其次所需时间相对较长,如加大压力和流速,则造成了细胞的损失,因此,人们常常在流式细胞分选血小板前,作其分离的预分离,分离出富血小板血浆,以提高血小板在样本中所占的比例,从而可以提高压力和流速,节省时间。