如何用PCR技术对核酸进行检测

A. 简述PCR技术操作步骤

PCR即聚合酶链式反应（Polymerase chain reaction）的缩写，它是体外酶促合成特异DNA片段的方法。这一方法的要点是合成两个分别互补于待扩增DNA片段两端的小片段引物，在含有引物、待扩增DNA模板核苷酸底物和DNA多聚酶的反应体系中DNA复制反复进行，在短时间内可以取得大量扩增产物。其原理是寡聚核苷酸链引物在DNA聚合酶的作用下沿模板延伸，合成两个与靶DNA两侧序列互补的引物，在体外进行靶DNA的重复合成。
主要的技术步骤是：
（1）DNA变性 加热使靶DNA序列双链解离成单链DNA。
（2）引物与靶DNA退火 适当降低温度，使两个引物分别结合成靶DNA两条的3′末端向5′末端延伸。
（3）引物延伸 在DNA聚合酶的催化下，引物沿着靶DNA3′末端向5′末端延伸。新合成的DNA链在变性解离后，又可作为模板与引物杂交，并且在DNA聚合酶的催化下，引导合成新的靶DNA链。如此反复进行以上3个步骤，即可使靶DNA片段指数性扩增。

B. 什么是核酸检测怎么检测

核酸检测是在实验室的条件下，通过分析致病微生物DNA或者RNA基因学的序列，进行临床病因学的确诊。此种核酸检测的方法是利用PCR扩增的方法进行检测，需要很多的步骤，最快也要6个小时才能出结果。此种检测灵敏度高、成本高，完全手工操作，工作量非常大，同时要求实验室的条件也非常高。它是目前及早确定病人是否感染病毒，以及及早发现和及早治疗最有效的检测方法新型冠状病毒核酸检测的方法，目前采用的是实时PCR荧光法这种PCR荧光法也叫聚合酶链式反应，是通过一种分子生物学的技术用来放大这种极少见的RNA病毒。可以将新冠病毒RNA片段扩增到百万倍以上，这样更容易检测出新冠病毒

C. 核酸病毒检测有PCR和快检，这两个检测方式有什么区别

检验核酸病毒有PCR和快检两种方式，一般常规PCR检测是在样品采集之后，要对样品进行核酸纯化，再进行后续的PCR反应，在这个过程中大约需要30~60分钟。在进行PCR检测的过程中，可以进行多个样本的检测，PCR反应的时间大约在两个小时左右。不同医院的仪器设备不同，仪器的好坏能够影响检测样本的多少，通常一个反应板可以同时检测96个样品。

医护人员采集人们的少量咽拭子，根据其中病毒的浓度来确定是否是阳性，还是阴性。新冠肺炎病毒的核酸物质主要是RNA，在检验过程中通过技术可以将RNA进行逆转录，转化为DNA。 PCR技术可以通过特殊的酶在生物体外，对转录的DNA片段进行复制，再将DNA片段扩大，从而达到检测的目的。选择核酸检测的方式主要根据自己情况而定，主要依靠医生的判断。