⑴ 病理切片一般要用到那一种显微镜
癌细胞病理切片在显微镜放大几倍,才能区别出它与正常细胞问题补充:医院病理用100X.200X.400X这几个倍数看就行!200X用的会多一些. 哪一种癌
⑵ 试以某一生物样本做透射电镜观察,采用超薄切片法制备样本,详细论述处理过程
摘要 在透射电镜的样品制备方法中,超薄切片技术是最基本、最常用的制备技术。超薄切片的制作过程基本上和石蜡切片相似,需要经过取材、固定、脱水、浸透、包埋聚合、切片及染色等步骤。
⑶ 负染色电镜技术要超薄切片么如果不切片用什么显微镜观察
不用进行超薄切片,只要用电子显微镜观察就可以了.
⑷ 填空题 电镜超薄切片技术包括( )、( )、( )、( )等四个步骤
电镜超薄切片技术包括(固定)、( 包埋)、(切片 )、(染色 )等四个步骤
⑸ 石蜡切片技术和超薄切片技术有什么区别求答案
石蜡切片不仅用于观察正常细胞组织的形态结构,也是病理学和法医学等学科用以研究、观察及判断细胞组织的形态变化的主要方法,而且也已相当广泛地用于其他许多学科领域的研究中。教学中,光镜下观察切片标本多数是石蜡切片法制备的。活的细胞或组织多为无色透明,各种组织间和细胞内各种结构之间均缺乏反差,在一般光镜下不易清楚区别出;组织离开机体后很快就会死亡和产生组织腐败,失去原有正常结构,因此,组织要经固定、石蜡包埋、切片及染色等步骤以免细胞组织死亡,而能清晰辨认其形态结构。
超薄切片技术由于电镜产生的电子束穿透能力很弱,必须把标本切成厚度小于0.1um以下的薄片才适用,这种薄片称为超薄切片。常用的超薄切片厚度是50-70nm。在透射电镜的样品制备方法中,超薄切片技术是最基本、最常用的制备技术。超薄切片的制作过程基本上和石蜡切片相似,需要经过取材、固定、脱水、浸透、包埋聚合、切片及染色等步骤。
⑹ 超薄切片技术操作过程是什么
观察病毒在细胞组织内的状态,可采取超薄切片技术,将标本用固定液固定后,经过脱水渗透包埋聚合切片等过程,切成薄片然后染色检镜。
(1)固定。
常用的固定液主要有锇酸固定液、醛固定液、高锰酸盐固定液等。
①锇酸固定液:这是最常用的固定液,作用迅速,新鲜的锇酸呈浅黄色,其蒸气极毒,使用时应在强通风柜中把装有锇酸的安瓿瓶在缓冲液内敲碎。
②醛固定液:植物材料具有厚壁,锇酸固定液不能很好渗透,有时固定得不好。而醛固定液往往可获得较好效果,同时还不会破坏酶的活性,可以在切片上进行组织化学测定。常用的有甲醛固定液和戊二醛固定液。
③高锰酸盐固定液:此种固定液可保持膜的结构,但破坏核糖体并失去酶的活性,对维持TMV粒子在细胞内的排列比戊二醛及锇酸固定液好。
缓冲液可用1%液体锇酸和1%过锰酸钾,也可用磷酸盐巴比妥-醋酸和二甲胂酸盐缓冲液。固定可在0~5℃或室温下进行,供试材料尽可能使用幼嫩的植株,小的根可整个固定,叶片需剪成1~2cm的小块。叶中的空气会阻止固定液与大部分细胞接触,可在真空下把空气除去。
组织固定后必须彻底冲洗,在进行锇酸固定前要把多余的醛用缓冲液冲洗彻底。固定后的组织一定要进行脱水,特别是采取不溶于水的树脂包埋时,在室温低于4℃时,丙酮或乙醇脱水效果都很好。
(2)包埋。
包埋用的树脂可分为四类,即甲基丙烯酸酯、环氧树脂、聚酯树脂和各种水溶性化合物。
甲基丙烯酸酯在聚合过程中可能引起组织损伤,在电子束轰击下,这种介质有升华的趋向,引起细微组织结构的破坏。但甲基丙烯酸酯也有优点,它比环氧树脂能切出较大的切块切面,切片也容易染色。
环氧树脂和聚酯树脂是保存细胞细微结构的最好包埋材料,目前最常用的环氧树脂是Epon和Araldite,用它包埋的标本可避免聚合损伤,树脂切片在电镜下不升华,可使标本连续观察,并保存细微结构。
水溶性树脂剂对一些不希望用有机溶剂脱水,或利用组织切片做酶外处理试验特别有用,其缺点是不能很好地保持细胞的细微结构。
组织需在包埋介质中充分渗透,常用的有两种方法:
①环氧树脂包埋组织的渗透。将丙醇脱水的组织转到装有6ml由等量丙酮和环氧树脂的标本管中,将标本管放在烤箱内由倾斜45°角的马达带动的轮上,使其不断转动,丙酮由开口的管中蒸发,当丙酮味消失后,将组织在擦镜纸上吸干,浸入新鲜的树脂中,再于同一温度下放4h,再一次吸干组织后,移到装有新鲜树脂的胶囊内,将Epon块放在40℃下,直至完全变硬,并继续在60℃下凝固12h。
②水溶性树脂包埋组织的渗透。将组织在戊二醛中固定,在缓冲剂中冲洗1~12h,然后在80%GMA单体和20%的水中脱水20min,再于97%GMA单体和3%的水中继续脱水20min后,在制备的聚合混合物中渗透过夜。将组织放在烘炉内的明胶胶囊中,注满聚合混合物除去所有空气泡,盖好使其不使与空气接触,把胶囊用金属丝垂直吊起,用长波长的紫外光聚合1~3d即可。
(3)切片。
切片前切去埋块四周的树脂,留下高2~3mm的标本正方柱,装入切片机,使埋块面的平行边与刀口平行,把刀慢慢向标本推进,通过切片机上的目镜系统,把刀推到看不到有间隙之处,每次推进0.5~1.0μm,直到切下切片。切片厚度以能达到浮于液面的切片呈灰色为最好。切片可用醋酸双氧铀和柠檬酸铅进行染色。染色后的切片在0.1N氢氧化钠中冲洗,然后用水冲洗。
⑺ 电子显微镜下观察不需经超薄切片的样品时,通常用哪些染色方法
电子染色是利用重金属盐对用于电镜观察的超薄切片进行染色,以增强标本反差的一种染色方法。重金属有增强电子散射的作用,不同结构因染色程度不同而具有不同的散射强度,在电镜下显示为不同的明暗反差。
光学染色是利用可见光的透射分辨观察对象的,通过染料着色,将对象的不同组分或组织、性质加以区别。
总的说,前者是为了增大电子束的区分度,后者是为了增加可见光的区分度。
⑻ 石蜡切片技术和超薄切片技术有什么区别
石蜡切片(paraffin section) 组织学常规制片技术中最为广泛应用的方法。石蜡切片不仅用于观察正常细胞组织的形态结构,也是病理学和法医学等学科用以研究、观察及判断细胞组织的形态变化的主要方法,而且也已相当广泛地用于其他许多学科领域的研究中。教学中,光镜下观察切片标本多数是石蜡切片法制备的。活的细胞或组织多为无色透明,各种组织间和细胞内各种结构之间均缺乏反差,在一般光镜下不易清楚区别出;组织离开机体后很快就会死亡和产生组织腐败,失去原有正常结构,因此,组织要经固定、石蜡包埋、切片及染色等步骤以免细胞组织死亡,而能清晰辨认其形态结构。
超薄切片技术由于电镜产生的电子束穿透能力很弱,必须把标本切成厚度小于0.1um以下的薄片才适用,这种薄片称为超薄切片。常用的超薄切片厚度是50-70nm。在透射电镜的样品制备方法中,超薄切片技术是最基本、最常用的制备技术。超薄切片的制作过程基本上和石蜡切片相似,需要经过取材、固定、脱水、浸透、包埋聚合、切片及染色等步骤。
⑼ 什么是超薄切片技术
由于电镜产生的电子束穿透能力很弱,必须把标本切成厚度小于0.1um以下的薄片才适用,这种薄片称为超薄切片。常用的超薄切片厚度是50-70nm。在透射电镜的样品制备方法中,超薄切片技术是最基本、最常用的制备技术。超薄切片的制作过程基本上和石蜡切片相似,需要经过取材、固定、脱水、浸透、包埋聚合、切片及染色等步骤。
http://bioem.sysu.e.cn/wiki/index.php/%E5%86%B7%E5%86%BB%E8%B6%85%E8%96%84%E5%88%87%E7%89%87%E6%8A%80%E6%9C%AF