体外用什么技术得到反转录产物

1. 分不清反转录和反转录PCR，希望能人帮我解释一下

反转录是以RNA为模板,通过反转录酶,合成DNA的过程，是DNA生物合成的一种特殊方式。又称为逆转录PCR。其原理是：提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo(dT)或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增，而获得目的基因或检测基因表达。RT-PCR使RNA检测的灵敏性提高了几个数量级，使一些极为微量RNA样品分析成为可能。该技术主要用于：分析基因的转录产物、获取目的基因、合成cDNA探针、构建RNA高效转录系统

2. 逆转录的原理及主要过程

原理：提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增，而获得目的基因或检测基因表达。过程：在逆转录酶作用下以dNTP为底物，RNA为模板，tRNA为引物。

按5′→3′方向，合成一条与RNA模板互补的DNA单链。然后它与RNA模板形成RNA DNA杂交体，随后又在反转录酶的作用下，水解掉RNA链，再以此DNA为模板合成第二条DNA。逆转录过程是病毒的复制形式之一，如RNA病毒中的逆转录病毒，DNA病毒中的嗜肝DNA病毒和花椰菜花叶病病毒的复制均需要经过逆转录。

逆转录过程在真核细胞中也同样存在，例如逆转座子和端粒DNA的延长均存在逆转录过程，需逆转录酶的催化。逆转录过程的揭示是分子生物学研究中的重大发现，是对中心法则的重要修正和补充。

人们通过体外模拟该过程，以样本中提取的mRNA为模板，在逆转录酶的作用下，合成出互补的cDNA，构建cDNA文库，并从中筛选特异的目的基因。该方法已成为基因工程技术中最常用的获得目的基因的策略之一。

3. 基因工程反转录法和化学法是什么

反转录是将rna反转录为dna，化学法是按照预定序列一个碱基一个碱基地进行核酸片段拼接合成

4. PCR技术是运用于鸟枪法和反转录法吗

PCR技术 是用来体外合成DNA的技术而鸟枪法（直接获取）反转录法都是获取的方法，用这两种方法获取以后，可以用PCR技术扩增。

5. RT-PCR的原理是什么有何用途

原理是：提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo（dT）或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增，而获得目的基因或检测基因表达。

该技术主要用于：分析基因的转录产物、获取目的基因、合成cDNA探针、构建RNA高效转录系统。

RT- PCR（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction）即逆转录PCR，是将RNA的反转录（RT）和cDNA的聚合酶链式扩增（PCR）相结合的技术。

首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA，再以cDNA为模板，扩增合成目的片段。RT-PCR技术灵敏而且用途广泛，可用于检测细胞中基因表达水平，细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。

作为模板的RNA可以是总RNA、mRNA或体外转录的RNA产物。无论使用何种RNA，关键是确保RNA中无RNA酶和基因组DNA的污染。

用于反转录的引物可视实验的具体情况选择随机引物、Oligo dT 及基因特异性引物中的一种。对于短的不具有发卡结构的真核细胞mRNA，三种都可。

(5)体外用什么技术得到反转录产物扩展阅读

反转录酶的选择

1、Money 鼠白血病病毒（MMLV）反转录酶：有强的聚合酶活性，RNA酶H活性相对较弱。最适作用温度为37℃。

2、禽成髓细胞瘤病毒（AMV）反转录酶：有强的聚合酶活性和RNA酶H活性。最适作用温度为42℃。

3、Thermus thermophilus、Thermus flavus等嗜热微生物的热稳定性反转录酶：在Mn存在下，允许高温反转录RNA，以消除RNA模板的二级结构。

4、MMLV反转录酶的RNase H突变体：商品名为SuperScript 和SuperScriptⅡ。此种酶较其它酶能多将更大部分的RNA转换成cDNA，这一特性允许从含二级结构的、低温反转录很困难的mRNA模板合成较长cDNA。

6. 要在体外获得大量反转录产物，常用什么技术

PCR技术

7. dna分子切割后的片段分析

(1) 粘性末端和平末端 (2) 切割产生的DNA片段末端与EcoR Ⅰ切割产生的相同(3) 大肠杆菌DNA连接酶和T4DNA连接酶 (4) mRNA（或RNA） c DNA（或DNA） PCR(5) 噬菌体和动植物病毒 解析 分 析： 限制性内切酶切割DNA分子后可产生两种类型的末端，即平末端和黏性末端。质粒运载体可以用EcoR Ⅰ切割，也可以用另一种限制酶切割，说明该酶切割产生的DNA片段末端与EcoR Ⅰ切割产生的相同。基因工程使用的DNA连接酶按来源分，可分为大肠杆菌DNA连接酶和T4DNA连接酶。反转录是质以mRNA为模版，逆转录形成DNA的过程，之后可采用PCR技术大量扩增DNA。基因工程的运载体有质粒、噬菌体和动植物病毒。 考点： 本题考查基因工程的相关知识。 点评： 本题意在考查考生的识记能力，属于容易题。

8. 反转录的模板

DNA啊!PCR是以脱氧核糖核苷酸为原料的 而MRNA的组成是核糖核苷酸 原料都不同
而且PCR技术的原理是利用DNA双链的原理.以MRNA为原料会得到双链的RNA

9. 2012新课标卷第40（4）反转录作用的模板是MRNA，产物是CDNA。若要在体外获得

DNA啊!PCR是以脱氧核糖核苷酸为原料的 而MRNA的组成是核糖核苷酸 原料都不同
而且PCR技术的原理是利用DNA双链的原理。 以MRNA为原料会得到双链的RNA