使用pcr技术需要满足哪些条件

⑴ pcr技术前提条件

DNA的合成前端必须是有一小段序列,接着这段序列合成,而不能凭空合成.它前面这一小段序列就是你所要有设计的引物,也就是“一段已知目的基因的核苷酸序列”.需要根据你的模板链设计.因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物.

⑵ 下列属于PCR技术的条件的是

单链的脱氧核苷酸序列引物，目的基因所在的DNA片段，脱氧核苷酸，核糖核苷酸，DNA连接酶，DNA聚合酶，DNA限制性内切酶。

PCR是以DNA半保留复制机制为基础，发展出的体外酶促合成，扩增特定核酸片段的一种方法，DNA复制是模板依赖性的，必须以亲代DNA链作为模板，亲代DNA的两股链解开后，可分别作为模板进行复制。

同时DNA复制需要以四种脱氧核糖核苷酸，即dATP，dGTP，dCTP，dTTP，为底物合成子代DNA。

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注意事项：

标准的缓冲液含 1pmol/ml Tris ·HCl，其 pH 为 8.3-9.0（室温），而在延伸温度（72 ℃）下，pH 值接近 7.2 。缓冲液中含有一种二价阳离子，用于激活 DNA 聚合酶的活性中心，一般使用 Mg2+。

Taq DNA 聚合酶以 DNA 为复制模板，从将DNA由5'端点开始复制到 3'端的酶。DNA 聚合酶的主要活性是催化 DNA 的合成（在具备模板，引物，dNTP 等的情况下）及其相辅的活性。

必须一直保存于－20℃，内含甘油保存。最适反应温度 72 ℃，即延伸温度。通常在配制 PCR 体系的最后加入。

⑶ PCR技术扩增DNA,需要的条件是 （ ）

【答案】A
【答案解析】试题分析：PCR技术需要目的基因作为扩增的模板，DNA聚合酶催化反应的进行，而引物是满足DNA聚合酶起作用的需要，四种脱氧核苷酸是该过程的原料。综上所述，A正确。
考点：本题考查PCR技术的有关知识，意在考查考生识记能力和理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系的能力。

⑷ pcr技术扩增dna需要的条件是

①PCR技术需要目的基因作为模板，①正确；
②PCR技术中需要一对引物，②正确；
③PCR技术中需要四种脱氧核苷酸作为原料，③正确；
④PCR技术是体外扩增DNA的，不需要mRNA，④错误；
⑤PCR技术需要热稳定DNA聚合酶等，⑤正确；
⑥PCR技术是体外扩增DNA的技术，不需要核糖体，⑥错误．
故选：D．

⑸ pcr的反应条件是什么

PCR反应条件为温度、时间和循环次数。

温度与时间的设置：基于PCR原理三步骤而设置变性-退火-延伸三温度点。在标准反应中采用三温度点法，双链DNA在90～95℃变性，再迅速冷却至40 ～60℃，引物退火并结合到靶序列上，然后快速升温至70～75℃，在Taq DNA 聚合酶的作用下，使引物链沿模板延伸。对于较短靶基因（长度为100～300bp时）可采用二温度点法，除变性温度外、退火与延伸温度可合二为一，一般采用94℃变性，65℃左右退火与延伸（此温度Taq DNA酶仍有较高的催化活性）。

①变性温度与时间：变性温度低，解链不完全是导致PCR失败的最主要原因。一般情况下，93℃～94℃lmin足以使模板DNA变性，若低于93℃则需延长时间，但温度不能过高，因为高温环境对酶的活性有影响。此步若不能使靶基因模板或PCR产物完全变性，就会导致PCR失败。

②退火（复性）温度与时间：退火温度是影响PCR特异性的较重要因素。变性后温度快速冷却至40℃～60℃，可使引物和模板发生结合。由于模板DNA 比引物复杂得多，引物和模板之间的碰撞结合机会远远高于模板互补链之间的碰撞。退火温度与时间，取决于引物的长度、碱基组成及其浓度，还有靶基序列的长度。对于20个核苷酸，G+C含量约50%的引物，55℃为选择最适退火温度的起点较为理想。引物的复性温度可通过以下公式帮助选择合适的温度：

Tm值（解链温度）=4（G+C）＋2（A+T）

复性温度=Tm值-（5～10℃）

在Tm值允许范围内，选择较高的复性温度可大大减少引物和模板间的非特异性结合，提高PCR反应的特异性。复性时间一般为30～60sec，足以使引物与模板之间完全结合。

③延伸温度与时间：Taq DNA聚合酶的生物学活性：

70～80℃ 150核苷酸/S/酶分子

70℃ 60核苷酸/S/酶分子

55℃ 24核苷酸/S/酶分子

高于90℃时，DNA合成几乎不能进行。

PCR反应的延伸温度一般选择在70～75℃之间，常用温度为72℃，过高的延伸温度不利于引物和模板的结合。PCR延伸反应的时间，可根据待扩增片段的长度而定，一般1Kb以内的DNA片段，延伸时间1min是足够的。3～4kb的靶序列需3～4min；扩增10Kb需延伸至15min.延伸进间过长会导致非特异性扩增带的出现。对低浓度模板的扩增，延伸时间要稍长些。

循环次数循环次数决定PCR扩增程度。PCR循环次数主要取决于模板DNA的浓度。一般的循环次数选在30～40次之间，循环次数越多，非特异性产物的量亦随之增多。

⑹ pcr技术扩增dna需要的条件是什么

Pcr 技术扩增DNA 需要的条件是:DNA模板链，脱氧核苷酸原料， TaqDNA的聚合酶，引物等。

⑺ 下列属于pcr技术的条件的是

①PCR需要一对引物，即一对单链的脱氧核苷酸序列引物，①正确；
②PCR需要模板，即目的基因所在的DNA片段，②正确；
③需要脱氧核苷酸作为原料，③正确；
④核糖核苷酸是合成RNA的原料，而PCR合成的是DNA，④错误；
⑤采用PCR合成DNA时，不需要DNA连接酶，⑤错误；
⑥体外合成DNA时，需要DNA聚合酶，⑥正确；
⑦体外合成DNA时，不需要限制性内切酶，⑦错误．
故选：B．

⑻ PCR扩增的反应条件

PCR扩增的反应条件：

10×扩增缓冲液 10ul；4种dNTP混合物 各200umol/L；引物 各10～100pmol；模板DNA 0.1～2ug；Taq DNA聚合酶 2.5u；Mg2+ 1.5mmol/L；加双或三蒸水至 100ul。

PCR是一种体外DNA 扩增技术，是在模板DNA、引物和4种脱氧核苷酸存在的条件下，依赖于DNA聚合酶的酶促合反应，将待扩增的DNA片段与其两侧互补的寡核苷酸链引物经“高温变性——低温退火——引物延伸”三步反应的多次循环，使DNA片段在数量上呈指数增加。

(8)使用pcr技术需要满足哪些条件扩展阅读：

PCR扩增优点：

一、高灵敏度

PCR产物的产量呈指数级增长，pick（pg=10^-12g）的初始模板可以放大到微克（ug=10-6g）。在100万个细胞中可检测到1个靶细胞；在病毒检测中，PCR的灵敏度可达到3个RFU（斑块形成单位）；在细菌学中，最低检测率为3个细菌。

2、简单快捷

采用耐高温的TAQ DNA聚合酶进行PCR反应。将反应液一次加入，在DNA扩增液和水浴上进行变性退火延伸反应。一般来说，扩增反应在2-4小时内完成。扩增产物一般采用电泳分析，不一定用同位素分析，无放射性污染，易于推广。

三、样品的低纯度要求

DNA粗产物和总RNA可用作扩增模板，无需分离病毒或细菌和培养细胞。从血液、体液、咳嗽液、头发、细胞和活组织等临床样本中直接检测到。

参考资料来源：网络—PCR扩增

⑼ 高中生物PCR技术需要条件是高温和什么

所需条件:1.双链DNA模板
2.热稳定DNA聚合酶(Taq酶)(由台湾科学家钱嘉韵在美国黄石公园热泉嗜热菌体内首次发现)
3.引物(一小段有着特定序列的DNA或RNA)
4.四种脱氧核糖核苷酸
5.解链(变性)温度:90~95'C
引物结合(复性)温度:55~60'C
合成(延伸)温度:70~75'C

⑽ PCR实验室的条件

1、必须拥有标准的的PCR荧光实验室;
实时荧光定量PCR技术于1996年由美国Applied Biosystems公司推出
由于该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃，而且与常规PCR相比，它
有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点，目前已得到广
泛应用。本文试就其定量原理、方法及参照问题作一介绍
2、检测设备必须符合标准PCR荧光实验室设置要求;
荧光定量PCR仪+实时荧光定量试剂+通用电脑+自动分析软件，构成PCR-DNA/RNA实时荧光定量检测系统。
3、必须通过国家临床检验中心的验收和认证;4、检测人员必须通过国家临检中心业务培训并取得合格证书;
PCR实验室内工作人员必须参加由国家卫生部或各省临床检验中心举办的临床基因扩增培训班，并持证上岗。PCR实验室通过验收，实验室至少必须应有两个以上持有“临床基因检测上岗证”。PCR实验室必须建立严格的实验室管理制度、建立标准化操作程序（SOP）、建立系列质量管理文件等，确保实验室日常运行符合国家卫生部的要求，确保检测结果准确、确保实验室卫生安全，确保实验室长期稳定运行
5、必须在无菌无尘环境下进行操作