程序降温盒细胞多久可以拿出来

1. 我把需要冻存的细胞放 在-20度忘记拿到-80，放了10多天，还有活的希望吗BxPC-3

如果没有冻存盒，应该是先放4度12h，-20度12h，然后-80度，一个月内液氮保存。你可以先复苏试试。

2. 程序降温盒放室温多久可以用

将程序降温盒放入-80℃冰箱,冷冻4小时以上以达到冻存效果即可使用。

3. 用梯度降温冻存盒降温需要多长时间降到

异丙醇易挥发，并且容易吸收空气中的水分，所以在冷冻细胞的过程中可以辅助实现缓慢降温，直接从室温放进-80可以达到近似于1度/分钟。

4. 细胞培养的具体步骤和要求以及注意事项

一、细胞复苏

将冻存细胞从液氮中取出后，在37℃水浴锅内不断摇动促进其融化。移人15ml离心管中，加入10ml预热的DMEM完全培养基，轻轻吹匀，离心，2000rpmX2min，弃上清液。

加入10ml DMEM培养基清洗，弃上清液。加入10ml DMEM完全培养基，轻轻吹打，接种于10cm盘中，在含5%CO2的细胞培养箱中培养。

二、细胞传代

细胞密度达到80%~90%时．去培养基，10ml PBS清洗2次。加入3ml含0．25%EDTA的胰蛋白酶，放人细胞培养箱3min。加人1ml DMEM完全培养基终止胰酶消化，转移至15ml离心管。

加入10ml PBS清洗细胞培养盘，转移至15ml离心管，2000rpmX2min，弃上清液。再加入10ml PBS（经高压灭菌，保存于40C），吹匀，吸取10微升进行计数，按照1×106/盘接种，在含5%CO2的细胞培养箱继续培养。

三、细胞冻存

细胞密度达到80%～90%时，去培养基，10ml PBS清洗2次。加入3ml含0.25%EDTA的胰蛋白酶，放人细胞培养箱3min。加入lmlDMEM完全培养基终止胰酶消化，转移至15ml离心管。加入10ml PBS清洗细胞培养盘，转移至15ml离心管，2000rpmX2min，弃上清液。

加入lml冻存液（90%血清，10%DMSO），放入冻存盒内（盒内有异丙醇，以保证温度降低的速度），立即放入一80℃冰箱内，过夜，第二天放入液氮中，可以保存至少两年，如不放人液氮，可以保存三个月。

冻存液的配制：70%的完全培养基+20%FBS+10%DMSO.DMSO要慢慢滴加，边滴边摇。

注意事项

（1）进入细胞间开始细胞培养时，必须严格按照下列步骤操作：

①确定所有的细胞操作用的溶液和耗材都已经消毒并检测没有问题，不确定的溶液和耗材请勿使用，除非特殊情况，不要借用别人的溶液。

②确定衣服的袖口已经卷起或者白大褂的袖口已经扎紧。

③确定酒精灯内的酒精量，需要的话及时进行补充。

④确定所有需要用到的溶液和耗材都放在伸手可及的位置。为了方便单手开启瓶盖，实验开始前可以把所有瓶盖旋松。

⑤尽量不要直接倾倒溶液，除非瓶口没有被烧坏。如果倾倒失败，溶液粘在瓶口，请用喷过75%酒精的纸巾仔细清洁瓶口周围（不要接触到瓶口）后在火焰上简单烧灼。

⑥操作时如果不能肯定所用的耗材是洁净的，必须及时更换。

⑦实验完毕及时收拾，保持工作区域清洁整齐，最后用75%酒精清洁台面。

（2）细胞污染的预防

①实验用品防止污染。细胞培养所用试剂、耗材、器材的清洗、消毒要彻底，各种溶液灭菌要仔细，并在无菌实验检测阴性后才能使用。操作室及剩余的无菌器材要定期清洁、消毒、灭菌。

②操作过程防止污染。

③穿着容易起静电或吸附灰尘的衣物必须更换为白大褂后才能进入细胞间。

④实验开始前需要确定戴的手套没有问题，只要接触过生物安全柜之外的物品，必须及时对手套进行消毒。

⑤进入细胞培养间后关好门，坐下来尽量少走动以免影响生物安全柜的风帘。工作开始前要先用75%酒精棉球擦手和瓶盖。事先要严格检查所用的器材、溶液和细胞，不要把污染品或未经消毒的物品带入无菌室内，更不能随便使用，以免造成大规模污染。

⑥细胞操作时动作要轻，必须在火焰周围无菌区内打开瓶口，并将瓶口放在火焰周围简单转动烧灼，注意不要让火焰把塑料瓶口烧化。

⑦实验操作时生物安全柜的隔板要尽可能放低，尽量减少谈话，打喷嚏或咳嗽时绝对不能对着工作区，以免造成不必要的污染。

⑧瓶盖应当倒放在远离自己的地方，以避免瓶盖被误操作所污染。

⑨不要从敞开的容器口上方经过，以避免衣服上掉落不明物体对细胞的污染。

⑩实验操作时要注意及时更换巴斯德吸管、移液枪枪头和移液管，切勿一根管子做到底。一旦发现接触了非洁净或者无法确定洁净的物品必须直接丢弃。实验完毕应及时收拾，保持实验室清洁整齐，最后用75%酒精清洁台面。

（3）防止细胞交叉污染

①在进行多种细胞培养操作时，所用器具要严格区分，最好作上标记便于辨别。按顺序进行操作，一次只处理一种细胞，多种细胞多种操作一起进行时易发生t昆乱。

②在进行换液或传代操作时，粘有细胞的移液枪头和移液管不要触及试剂瓶瓶口，以免把细胞带到培养基中污染其他细胞。

③所有细胞一旦购置，或从别处引入，或自己建立，必须及时保种冻存，一旦发生污染可重新复苏细胞，继续培养。

(4)程序降温盒细胞多久可以拿出来扩展阅读：

细胞培养（cell culture）是指在体外模拟体内环境（无菌、适宜温度、酸碱度和一定营养条件等），使之生存、生长、繁殖并维持主要结构和功能的一种方法。细胞培养也叫细胞克隆技术，在生物学中的正规名词为细胞培养技术。

不论对于整个生物工程技术，还是其中之一的生物克隆技术来说，细胞培养都是一个必不可少的过程，细胞培养本身就是细胞的大规模克隆。细胞培养技术可以由一个细胞经过大量培养成为简单的单细胞或极少分化的多细胞，这是克隆技术必不可少的环节，而且细胞培养本身就是细胞的克隆。

细胞培养技术是细胞生物学研究方法中重要和常用技术，通过细胞培养既可以获得大量细胞，又可以借此研究细胞的信号转导、细胞的合成代谢、细胞的生长增殖等。

5. tct几天出结果

一般医院TCT在3-7天内出结果。

TCT宫颈防癌细胞学检查对宫颈癌细胞的检出率为100%，同时还能发现部分癌前病变，微生物感染如霉菌、滴虫、病毒、衣原体等。所以TCT技术是应用于妇女宫颈癌筛查的一项先进的技术。

经过TCT薄层液基细胞学检测后，如果发现宫颈细胞有异常，则需要进行阴道镜检查。在电子阴道镜高倍放大40倍下，观察宫颈癌前病变好发现表层的细微变化，对于宫颈癌及癌前病变的早期发现、早期诊断具有重要价值。

(5)程序降温盒细胞多久可以拿出来扩展阅读：

由于TCT检查在取样时已经将标本固定，所以在一定时间内都是稳定的，出结果时间的差异主要是由于一般医院在等到一定量时集中监测。

TCT检查是液基薄层细胞检测的简称，采用液基薄层细胞检测系统检测宫颈细胞并进行细胞学分类诊断，它是目前国际上最先进的一种宫颈癌细胞学检查技术，与传统的宫颈刮片巴氏涂片检查相比明显提高了标本的满意度及宫颈异常细胞检出率。

6. 细胞放在冻存管里然后放程序降温盒里，但是没有立刻放-80……

没事啊，正常步骤就应该4摄氏度2h，-20摄氏度2h，-80摄氏度2h，然后放液氮罐。

7. 细胞冻存为什么要进行程序性降温

一般冻存盒中加入甘油的居多吧。丙二醇，异丙醇加入后，一方面防止由于溶液效应而使细胞脱水及蛋白质变性；另一方面在稍低于溶液冰点时人工强行诱导结冰，以免出现溶液过冷现象，防止结冰时释放潜热引起温度回升，以及形成大的冰晶，减轻对细胞的损伤。在一步冷冻中．选用高浓度的渗透性保护剂组成的玻璃化溶液，在冷冻过程中，不发生结晶而形成玻璃样固体，维持液态时的正常分子与离子分布，使细胞内发生玻璃化而起到保护作用。

8. 干细胞实验室程序降温室工作制度

摘要 目的 建立实验室管理使用规程，保证操作者正确使用。

9. 细胞冻存程序降温盒哪里有

我们实验室学长用的是晶安生物的 国产的

10. 为什么 程序降温盒中异丙醇用5次就要更换

一般冻存盒中加入甘油的居多吧。丙二醇，异丙醇加入后，一方面防止由于溶液效应而使细胞脱水及蛋白质变性；另一方面在稍低于溶液冰点时人工强行诱导结冰，以免出现溶液过冷现象，防止结冰时释放潜热引起温度回升