裸鼠成瘤数据结果如何

A. bablc小鼠尾巴变白

bablc小鼠尾巴变白的原因是因为实验产生的反应。bablc小鼠身上做裸鼠成瘤后尾部就会变白。后期会延伸至全身白。这是药物引起的化学反应。要注意观察小鼠的其他特征，结合具体特征记录数据。

B. 裸鼠为什么被广泛用于肿瘤实验它有什么优势

因为裸鼠没有胸腺，无法产生T细胞，没有细胞免疫，只有体液免疫，抵抗力低下，容易种植肿瘤，成瘤率高。

C. 无胸腺裸鼠的医学研究

近年来，无胸腺裸鼠作为一种新的动物模型，活跃于免疫学、肿瘤学、毒理学等各个领域的研究工作中，尤其在免疫生物学、免疫病理学、移植免疫、肿瘤免疫、病毒和细菌免疫将等领域，在短短的数年中，就展开了一系列富有成效的新的研究，推动了各方面的工作，为实验免疫学、实验肿瘤学多供了新的有效的工具。
解剖裸鼠进行组织学检查，证实裸鼠无正常胸腺，仅有胸腺残迹或异常的胸腺上皮，这种胸腺上皮不能使T细胞正常分化。淋巴结及脾脏胸腺依赖区淋巴细胞数目很少，所以裸鼠都是淋巴细胞减少症的动物，皮肤毛干萎缩，毛囊角化。
裸鼠T淋巴细胞缺损，表现为脾细胞失去细胞表面的θ抗原和丧失对有丝分裂刺激物反应的能力。θ抗原是某些淋巴样细胞在其T细胞活化前的一种分化抗原。由于裸鼠没有T细胞，不能执行正常T细胞的功能，它们在混合淋巴细胞反应中没有有丝分裂反应，也不产生细胞毒效应细胞，对刀豆素A或植物凝集素P亦无促分裂原应答，无接触敏感性，无移植排斥，无移植抗宿主反应及无辅助T细胞或抑制T细胞的生成。无辅助和抑制T细胞的裸鼠，可明显地改变它对原抗体的反应。
注胸腺（thymus）为机体的重要淋巴器官。其功能与免疫紧密相关，分泌胸腺激素及激素类物质，具内分泌机能的器官。胸腺是造血器官，能产生淋巴细胞，并运送到淋巴结和脾脏等处。这种淋巴细胞对机体的细胞免疫具有重要作用。 （人类肿瘤移植）研究
由于裸鼠的免疫缺陷，在一定情况下，不排斥来自异种动物的组织移植。因此可作移植人类恶性肿瘤的接受体。根据T.Fogh等1979～1980年的报导，已有150株人的瘤细胞和人体原发癌移植于裸鼠获得成功，目前已成功地结肠癌、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、黑色素瘤、淋巴瘤、白血病、肾癌、宫颈癌、软组织肉瘤和骨肉瘤等移植于裸鼠、获得了一定百分比（35.7%）的良好生长，并可传代（见表4-1）。若用已建株的人体肿瘤组织培养细胞作移植材料，接种后的成活率更高（41%）。我国北京医科大学等5人医院，使用北京药品检定所繁殖的裸鼠对人体结肠癌、直肠癌、食道癌、乳腺癌、宫颈癌、咽癌、骨巨噬细胞癌的移植均获得了成功。
在裸鼠移植成功的人类恶性肿瘤
来自人体标本 例数
肺癌 5
胃癌 5
宫颈癌 5
Grawitz氏肿瘤 5
黑色素瘤 2
卵巢癌 2
上皮癌 2
KrudenBerg氏肿瘤 1
子宫内膜瘤 1
成骨肉瘤 1
脑膜瘤 1
神经细胞瘤 1
脂肉瘤 1
睾丸瘤 1
绒毛膜上皮癌 1
横纹肌肉瘤 1
来自组织培养 例数
肺癌
燕麦细胞型 2
腺癌型 4
鳞状细胞型 1
黑色素瘤 2
骨巨细胞瘤 2
宫颈癌 1
子宫内膜癌 1
子宫内膜癌（恶性转移） 1
胆管瘤 1
乳癌 1
胃绒毛膜上皮癌 1
神经细胞瘤 1
成骨细胞瘤 1
淋巴网状细胞瘤 1
急性淋巴性白血病 1
非洲淋巴细胞癌 1
人体肿瘤移植于免疫缺陷动物，能保持其生物学特性，用于研究人体肿瘤对药物的敏感性有很大帮助。早期工作是将人体肿瘤移植于动物缺乏免疫机能的特殊部位，如鸡胚、动物的眼前房，仓鼠颊囊内等，虽有一定比例的成活率，但因肿瘤生长缓慢又受移入部位包膜的限制，肿块往往较小，难于传代，更不能适应需要较多瘤源的实验治疗工作。
肿瘤已成为当前威胁人类最严重的常见病之一，每年死于此病的人数以百万计，因此，建立模型，进行防治研究，是基础医学研究中的重要课题。我国在这方面已开始做了不少探索，已建立了18种裸鼠移植瘤（见表4-2）。从研究范围来看，有以下六个方面。
1．人癌细胞株致癌性的检测及其裸鼠移植瘤的建立。
2．人癌裸鼠移植瘤的建立及其生物特性的研究。
3．人癌浸润转移调控机理的研究。
4．乙型肝炎病毒基因工程疫苗研究中高效表达HBsAg细胞系致癌性检定。
5．人癌实验性治疗的研究。
6．肿瘤病因学的研究一化学致癌物质致癌性的研究。
在这些研究所项目中，除人鼻咽癌裸鼠移植癌的建立未获成功外，其余各项均获得成功。如北医的人肠粘膜腺瘤裸鼠移植瘤，裸鼠间的移植传代成活率为100%，具有人类原发瘤特性。并获得了肺癌高转移率的裸鼠移植瘤。又如乳腺髓样瘤等细胞系致癌性检定和裸鼠移植癌的建立，其成功率为83.8～100%，超过了国际上60%的报导。
移植于裸鼠的人类恶性肿瘤具有以下特征：
1．被移植肿瘤仍保持原有组织学构造或各种机能。
2．将人癌组织的组织培养物移种于裸鼠时，能重现已在组织培养中消失的原有的癌结构。
3．几乎未发现被移植肿瘤的转移。
上述特征有助于分析人类肿瘤的性质。
1．裸鼠体内免疫缺陷机制恒定，其它鼠类需另加去免疫措施，其条件恒定性受个体差异因素影响。
2．可以控制肿瘤的致癌性，使人体肿瘤移植后良好生长。
3．接种成功的瘤结构具有原肿瘤的结构特点，有利于体外培养的瘤细胞株的鉴定；
4．研究肿瘤在体内的生长行为与过程，探讨肿瘤与宿主免疫间的相互关系。
5．体内和体外研究互补配合进行观察。
6．可利用其建立稳定的动物模型，进行药物筛选。肿瘤细胞形态、染色体含量和同功酶水平与人体肿瘤一样，说明未发生细胞选择和细胞杂交现象，细胞动力学和生物化学特征也未改变。
7．在动物体内进行连续接种传代后的肿瘤细胞，在体外培养中也易于获得长期生存，可提高培养的成功率等。
因此，裸鼠的应用，将对肿瘤基础研究工作做出新的贡献。
肿瘤药物治疗和肿瘤免疫研究
裸鼠接种成活的肿瘤对化疗药物的敏感性与临床所见十分相近。黑色素瘤以DTIC和CCNU的抑瘤作用较强，而5-Fu则无效，与其临床客观疗效（三药分别为20%、12%及2.5%）结果相似。人的Burkitt淋巴瘤的裸鼠移植后对环磷酰胺有较高的敏感性，也与临床结果相符。其它肿瘤如乳腺癌和结肠癌裸鼠移植，对前者阿霉素（5mg/kg）、5-Fu(50～80mg/kg)和苯丙氨酸氮芥（7mg/kg）均有一定的抑瘤效能，对后者甲基一CCNO和丝裂毒素也明显疗效。有趣的是对P333无效的六甲密胺，却对人体肺癌异种移植有效，应用其耐受剂量60～90mg/kg都有消瘤作用，对人体乳瘤MX-1和结肠瘤CX-1也有效。此药重新临床试用，证明对人支气管肺癌和淋巴瘤都有治疗作用。最近，对过去因毒性较大而中断研究的偶氮氧代正亮氨酸，重新用人肿瘤裸鼠模型评价，证明对MX-1和肺癌LX-1有明显疗效，又重新进入临床研究。近有人用胸腺嘧啶核苷等444～888mg/kg给肿瘤裸鼠连续灌注96～140小时，发现它能明显抑制人体黑色素瘤及畸胎瘤的生长，并导致肿瘤消退而对宿主无明显毒性，这些新结果已引起了临床重视。
近年来将人癌组织移植入裸鼠肾囊膜内，观察肿瘤生长大小，在双目显微镜下测量肿瘤直径OMU，比较给药组和对照组的差异，在11天左右可以得到评价药物疗效的结果。
在肿瘤免疫研究方面，France报导无胸腺裸鼠用4（5）-33-二甲基-1三唑-5（4）碳胺[Dic4(5)-33-dimethyl-1-triazlon inidazole-5(4)Carboxamide] 处理后，明显增强了对L1210和L3TRA淋巴瘤株的免疫原性。
免疫和遗传研究
由于近代遗传学的迅速发展，已发现40余种免疫缺陷病与遗传因素有关。许多报导只介绍了这些疾病的临床表现和实验室检查结果，有关发病机理则停留在假说阶段，这主要是由于没有与人类所患的免疫缺陷性疾病相对应的自发性实验动物模型，无法通过患病动物来观察疾病发生与发展的全过程，从而无法阐明其遗传规律。
先天性无胸腺裸鼠的遗传因素，免疫动物原缺陷指标以及剖检所见和组织学观察等特征，均与人类免疫缺陷性疾病中的原发性细胞免疫病相似。各品系裸鼠因遗传背景的不同，所表现的细胞免疫反应和实验室检查指标亦各不相同。这些裸鼠种群是研究人类各种免疫缺陷性疾病的发病机理和遗传规律的动物模型。实验动物遗传学家已育成具有不同免疫缺陷特性的近交系小鼠达50余种。我国所应用的自发性免疫缺陷小鼠，主要应用的是BALB/C遗传背景的裸鼠，个别实验室也应用了NIH、ICR等非近交系裸鼠。
病毒、细菌、寄生虫感染机制的研究
无胸腺裸鼠的T淋巴细胞缺损，免疫机能低下，是研究病毒、细菌及寄生虫感染机制的极好模型动物。如可用于研究乙型脑炎SA14－14－ZHK7减毒株为乙脑活毒疫苗的选育株，在正常小鼠体内可产生符合规定的免疫原性（LD50），而在胸腺缺少或胸腺发育不良的生物个体免疫原性如何，对于今后现使用具有参考价值。实验结果可见表4-3，以BALB/C（+/+）小鼠为对照。
乙脑病毒感染后所产生的免疫力，主要属于细胞免疫，如使T细胞缺陷的裸鼠体内产生与免疫功能正常小鼠同等水平的免疫力，必须加大40倍的免疫剂量，才能达到。也说明裸鼠体内还存在着残余的T淋巴细胞。由此推论，在现场人群中产生抗体水平较低者，其T细胞功能是否缺陷，应作为因素之一加以探讨。
裸鼠已被证明是研究T淋巴细胞功能缺损下，分枝杆菌感染的最好模型，其肿瘤的自发率极低。
生物制品和药品的检定
生物制品（疫苗、菌苗）的安全性的免疫原性是制品必不可少的内容之一。它涉及制品是否有潜在制癌性、感染因子以及它的毒力是否有返祖的可能性。特别是在应用动物组织培养疫苗或人类二倍体细胞株时，对检出这些细胞潜在的致癌性、某些制品引起的异常发应及其发生机理、对药物致癌性或抗癌药物的研究等诸方面，先天性胸腺机能缺陷的裸鼠是很好的动物模型和实验手段。
微生物学上的研究
以往人类麻风杆菌只有背上够九条纹的犰狳（Armadillo）身上才能生长，而这种产于南美等地的动物难于寻找，也不易饲料和操作。1975年Colston等将麻风杆菌接种于裸鼠足掌，发现麻风杆菌可大量繁殖，全身扩散，引起瘤型麻风。这为研究麻风杆菌的生物特性、免疫原性和麻风病发病机理提供了极为有用的实验模型。
又如淋巴细胞性脉络膜脑膜炎（LCM）病毒经脑内接种于无本病毒隐性感染的正常小鼠，可引起脑膜炎，感染细胞被当作靶细胞而受到破坏，在脑、脊髓内发生了明显的细胞免疫反应，但在T细胞缺损的裸鼠所见却完全相反，未导致动物的死亡，仅出现持续病毒血症，体内不出现LCM抗体，也无任何免疫反应。
内分泌和老年医学上的应用
在人工摘除胸腺动物，大多数研究可见脑下垂体、甲状腺、肾上腺、性腺等出现异常。有人用无特定病原体环境中的饲料的裸鼠和正常小鼠进行研究，分析3、9、11周龄的雌雄动物的脑下垂体生长激素及甲状腺、肾上腺皮质和性腺的功能，结果发现两者间未见有统计学上的差别。
在老年医学的研究上，有人认为裸鼠没有T细胞，容易引起自身免疫现象，皮肤的可溶性胶原（Collaggen）也减少，因此认为胸腺、自身免疫、老化三者之间是有关系的。但这方面也有不同论点。
国内应用裸鼠开展的研究课题简况
1．T和NK细胞免疫功能缺陷型——Beige裸鼠育成及其基本特征的研究。
2．非近交系615/PBI-beige/nude小鼠免疫功能的初步研究。
3．T和NK细胞联合缺陷型小鼠体内人类肿瘤移植瘤的转移研究。
4．免疫缺陷型动物（裸鼠）体内人类肿瘤癌生长和转移的研究。
5．裸小鼠腹腔内筛选高转移性人肺腺癌细胞及其生物学特性的研究。
6．Urethane诱发BALB/c裸小鼠肺腺癌及其在裸小鼠皮下生长转移的特性。
7．五种人癌细胞株裸小鼠移植转移特性的初步研究。
8．裸鼠人体恶性黑色素瘤模型的建立和病理观察。
9．三株人肺癌裸小鼠移植模型长期传代的形态观察。
10．裸小鼠可移植性人肺癌瘤株的建立及其生长特性和微细的结构的观察。
11．裸鼠体内传代及体外培养的人小细胞肺癌细胞系的建立。
12．人肺巨细胞癌PLA-801群体细胞及其克隆化细胞株（A、C、D、E）裸鼠皮下种植后自发转移特性的研究。
13．人脑胶质瘤细胞系裸小鼠实体瘤模型NHG-1的建立及其特征的研究。
14．人脑室管膜瘤转移植于裸小鼠的实验研究。
15．两株裸大鼠人肝癌模型的建立和生物学特性的观察。
16．人胃癌裸鼠移植模型的建立及其生物学特性的初探。
17．人胃腺癌裸鼠动物模型的建立。
18．615裸鼠体内建立的人Burkitt淋巴瘤细胞株。
19．人直肠粘液腺瘤裸鼠移植瘤株的建立及传代的初步小结。
20．裸鼠人体原发性肝癌生长动力学的一些特点及其甲胎球蛋白分泌的研究。
21．流式细胞仪（Flow Cytometer）在裸鼠人体鼻咽癌生物学特性研究中的应用。
22．外放射顺铂及混合细菌疫苗多模型综合治疗对裸鼠人肝癌的实验研究。
23．裸鼠人肝癌模型在肝癌导向研究中的应用。
24．抗胶质瘤的McAb在人脑胶质癌裸小鼠模型NHG-1中的导向研究。
25．核素导向内放射合并高温对裸鼠人肝癌的治疗作用。
26．影响裸小鼠B淋巴细胞体外转化因素的初步探讨。
27．裸小鼠诸器官及血清双向电泳“蛋白图”。
28．裸小鼠血浆氨基酸测定。
29．三种人脑瘤裸小鼠模型的染色体初步分析。
30．应用裸鼠净化支原体污染细胞的初步观察。
31．裸鼠肝炎病理观察及分析。
32．裸鼠人体原发性肝癌实验资料的计算机处理。
33．小型SPF裸鼠实验室的建立及其在临床肿瘤实验中的应用。
34．用人肺腺癌移植瘤进行快速药敏试验。
35．人癌裸鼠移植瘤宿主血清中唾液酸及唾液酸糖蛋白含量变化的研究。
36．平阳毒素和博来霉素A6对裸鼠移植的人体肝癌和胃癌的抑制作用。
37．人低分化鼻咽癌上皮细胞株裸小鼠移植模型的研究。
38．裸鼠饲料灭菌方法探讨。
39．裸小鼠繁育与质量控制的初步报告。
40．SPF小鼠实验动物室的建立及繁殖应用研究。
41．裸鼠室的建立及裸鼠的繁育。
42．NC裸小鼠的繁育与人脑瘤移植。
43．免疫抑制小鼠模型的建立及人类大肠癌细胞株HRT-18的异种移植研究。
44．人类肿瘤细胞系裸小鼠体内移植的综合研究。
45．人癌移植于裸小鼠的实验研究。
46．无胸腺裸小鼠的皮肤病研究中的应用。

D. RKO细胞裸鼠动物试验的成瘤性如何

两个方法都是给裸鼠接种肿瘤细胞一个是原位接种如果是做乳腺癌就接种在脂肪垫上等成瘤以后取下肿瘤做组织切片HE染色看肿瘤边缘是否弥散还可以取出肺做切片看是否有肿瘤转移过去另一个方法是从尾静脉注射肿瘤细胞一段时间后取出肺做切片看是否有转移一般这两个实验都需要做的文献的话随便是googlescholar上搜cancermetastasis就有一堆的方法都一样我是专门做这个的所以比较清楚

E. 成瘤实验到底选小鼠好还是裸鼠好

要看你是什么基因了么。你想看什么效果啊。你自己也知道两种选择的优缺点。你想看那个基因怎么表达，表达的时候免疫系统怎么干涉。建议裸鼠，起码看起来清楚点。真不放心就两个都作，又不差这几只老鼠。

F. 小鼠致瘤实验在成瘤之前生物指标变化情况是怎样的，主要有哪些指标变化

（1）裸鼠，免疫缺陷的鼠，不然会有免疫排斥
（2）体外培养癌细胞，再皮下注射10的7次方癌细胞，一星期左右会长出瘤
（3）只要肿瘤有相应靶点，就都可以用的
（4）分肿瘤细胞培养 裸鼠成瘤实验 治疗那么多不可能都做的，过继免疫治疗要从血里密度梯度离心分离淋巴细胞（细胞实验），单抗偶联（分子实验），物理靶向不清楚，靶向药物（分子实验），研究生论文都不可能做这么多，这么多操作也不是说的清的，你可以一个一个的查文献。
（5）实验结果看瘤的大小，计算有专门的公式，比如短径的平方乘以长径。完全消失看剂量和运气了，一般不会完全消失。和阳性化疗药物对照相比，有效果就不错。定时记录，绘制肿瘤大小曲线，小鼠重量变化，还有定期杀小鼠称瘤的重量绘制瘤重曲线。评价标准很多，你可以参考论文，根据需要来定。

G. 裸鼠皮下成瘤实验技巧

1、细胞的状态是成瘤实验的关键，所以细胞生长状态一定要好，取处于对数生长期的细胞，细胞达80-90%左右密度为宜。收集细胞前一天晚上更换新鲜培养基。

2、胰酶消化细胞后用预冷的PBS洗两遍，目的为去除细胞中的血清。

3、用PBS或者无血清培养基吹打细胞沉淀至合适的浓度，一般皮下瘤接种的细胞量为1-5×10 ^{6个细胞/支，接种体积为0.1ml，因此细胞悬液的浓度为1-5×10} 7个细胞/ml。

4、细胞消化后应尽快接种到裸鼠皮下，一般尽量在半小时内完成，途中将细胞悬液放在冰上降低细胞的代谢。

5、选择的裸鼠一般在5-8周龄，体重18-20g左右，种植部位选择血供丰富区域，如腋窝中后部、腹股沟中上部。

6、接种前用枪将细胞悬液充分的吹散，防止细胞成团而降低细胞成活率。

7、接种时，针头在皮下进针深一点，约1cm深，减少注射后细胞悬液从针眼溢出。

8、如何抓牢裸鼠?左手拇指和食指捏紧裸鼠颈背部皮肤，小拇指夹住裸鼠尾巴。

9、接种后一周左右可以见到皮下开始出现肿块。

10、根据肿瘤细胞的特性和接种细胞的量，一般皮下成瘤的周期为1-2个月。肿瘤不宜生长过大，一般不要超过1000mm3 ，肿瘤负荷过大常常会以违背动物伦理而被杂志社刁难(因为这个问题悲惨地被plos one拒过稿）。

11、肿瘤大小测量一般为1周两次，游标卡尺测量肿瘤最长和最短部位。V=1/2 a b2 (a为长轴，b为短轴)。

12、皮下瘤取下后一部分冻液氮用作以后提蛋白和RNA，一部分福尔马林固定用做免疫组化、免疫荧光等。

H. 小鼠肿瘤大小变化数据分析

看同类的论文。发表什么样的论文，就看什么水平的论文。你的数据（第一组数据有6个，第二组有5个，第三组4个，第四组1个）很奇怪（难道是我理解错了？），发表时，会被质疑的。
建议，用表，把原始数据展示出来（肿瘤体积）。
再用图，把带有肿瘤的老鼠拍照照下来（整只老鼠都拍下来，带有肿瘤部位，视觉上对照组和实验组要相似的状态）。实验组和对照组放在同一张图中。
其次用柱状图（实验组和对照组之间的区别）和折线图（反应时间），加上bar（正负误差）。

I. 请问哪位高人知道骨肉瘤细胞在裸鼠身上的成瘤率如何哪个细胞亚系的成瘤率高些呢

这个问题不是应该在网络上面问的，应该去丁香园里面问。还可以找高人指导方法。

放心，我不是网站推销，如果哪个医学研究生还不知道丁香园就太落伍了。

J. 裸鼠皮下注射癌细胞需要注意哪些

1、细胞系的选择

并非所有的肿瘤细胞都可以成瘤。在正式做实验之前，建议去查查ATCC上面的测试数据。比如看看下面红框处。但是，ATCC这方面的数据很缺，所以第二条途径是去查文献。但建议查多篇文献。

如果不得不用不能独立成瘤或者难以成瘤的细胞系，请看第3点选NOD SCID小鼠，以及第4点的Matrigel法。

2、细胞数要多少

这一点，很难有个标准参考值。像我试过一个很猛的大鼠胶质瘤C6，就算只要10^4甚至更低细胞数都能长。不过，多数细胞系会落在10^5 - 10^6之间。有时候，低了不一定说不会长，而是长得慢。高了也不一定好，长太快，肿瘤内部的血管形成不良，容易坏死，而且做药物腹腔、静脉注射的话，也不容易充分运输到肿瘤灶部。

基本上可以有这么一个经验：注射的细胞量，可以让肿瘤在3-6周可以长到可以解剖的大小即可。快了不一定好，慢了浪费时间。

3、小鼠的选择

基本上，大家都是选BALB/c Nude这种胸腺缺陷的裸鼠，已经可以满足绝大多数实验了。对于一些对免疫比较敏感的肿瘤，可以选择NOD SCID。不过NOD SCID是长毛的，对于一些特殊的肿瘤注射或者手术，需要备皮。

一般而言，4-6周龄的小鼠即可注射肿瘤。

4、细胞怎么处理

从细胞房出发，到动物房之间，肯定需要很长的时间。细胞离开培养环境的时间一长，活性就会降低，导致实验失败。

这里我推荐，通过洗涤、消化、离心的方法，获得细胞沉淀后，要将其重悬在一个能够保持细胞活力的buffer。这个buffer的成分是：1X 无Ca2+、Mg2+的HBSS中，加入终浓度为10-15 mM的HEPES，以及1X的GlutaMAX。注意，请不要加入血清。

细胞的浓度，应该调整为每一针100-200 ul的量。比如，你要注射的细胞量是10^6一只，那就把细胞悬液的浓度调整为每100-200 ul的体积含有10^6个细胞。有的细胞很难达到高浓度，这时候就需要增大重悬体积。个人建议，最好不要超过300 ul一针，否则注射的时候很容易漏出来。

细胞重悬之后，插到冰上备用。

有些细胞即使用了NOD SCID也很难成瘤甚至成不了瘤，这时可以试试Matrigel法，为肿瘤细胞提供了一个生长支架。

一般地，我们使用低生长因子（Growth factor reced）无酚红Matrigel，大概的蛋白质浓度会在10 mg/ml左右。Matrigel最终会和细胞悬液1：1混合后注射。

注意两点：

1、温度一高，Matrigel就会凝固，因此使用时应该在冰上操作。在加入细胞悬液前，悬液也应该插到冰上降温。或者可以用另外一个办法，即先用上述的缓冲液1：1稀释Matrigel，再用来重悬细胞沉淀。含有Matrigel的细胞悬液，也应该始终插在冰上。

2、同样由于温度的问题，在注射时，应该注射一只吸一份悬液。此外多准备几根注射器，万一凝了堵了赶快换。

5、注射的方法

为了降低动物的痛苦，我会使用吸入式麻醉剂isoflurane（异氟醚）给小鼠进行浅麻醉，再注射。下图就是麻醉设备：右方是灌入isoflurane的设备，利用麻醉剂的挥发性，通过调整气压阀，将麻醉气体泵入左边的密封盒子里面。一般5分钟内，小鼠就能被麻倒，并可以保持约10-15分钟的麻醉时间。

当然，不麻醉也可以直接注射（在不违规的情况下）。但从动物福利的角度出发，以及方便实验人员而言，麻醉比不麻醉好。目前我所在的单位，皮下移植瘤实验的标准protocol都是要吸入麻醉的。但国内这一点做得还不是很好，没有统一的机构在管理。

注意，请合理使用麻醉剂。对于皮下注射来说，isoflurane吸入性麻醉已经足够了，危险性也比较低（在美国列为管制药品schele VI类，或者说不算经典的管制药物）。完全不需要使用注射性麻醉剂比如Ketamine/Xylazine（氯胺酮/甲苯噻嗪），这种属于管制药品了，不涉及大手术的不要用。其他注射类如苯巴比妥也不要用，可能会对肿瘤细胞的活性有影响。

如果没有isoflurane挥发机，可以自己做一个简易的装置。如下图，在一个密封的罐中，置入含有isoflurane稀释液的棉花，并把实验动物放进去即可。麻醉剂的剂量，是通过isoflurane比密封罐体积来换算的。

小鼠麻倒后，先用打孔器在耳朵上做标记（0/0，1/0，0/1，1/1，共计4种标记方式）。随后，一手用钝头的镊子轻轻拎起注射部位的皮肤，不要扯到肌肉，一手拿着注射器（一般都用那种小的胰岛素注射器）刺入皮肤，注射细胞悬液。在注射的过程中，你可以明显看到皮肤下方鼓起一个小包。注射完毕后，留针数秒再拔，不要马上拔出来，以免细胞悬液漏出来。

如果没有麻醉，那就只能靠手抓鼠了。如果你是右利手，那么用左手食指和拇指夹住小鼠颈部皮肤，将尾巴夹在小指和无名指之间，这样左手一翻，小鼠的侧面就暴露出来了。然后右手持针，贴着皮肤（目测都要和皮肤保持10-20度夹角了）进针。注意当针已刺入时，保持针头略微上挑的状态，以免刺入肌肉。值得注意的是，小鼠会挣扎，所以手要稳。（所以说啊，麻醉再注射多么方便）

一般而言，如果注射量仅有100-200 ul，这种操作手法不会出什么意外。但如果注射量大，就比较麻烦了。不过按照我师姐的说法是，可以在刺入皮肤后，继续往下进针刺入浅层肌肉，再上挑回到皮下，开始注射。这样子，大体积的细胞悬液就不容易漏出来。但是这种方法有个缺点是，肿瘤容易往肌肉深处长，到时候测量体积就不准了。因此，注射量应该尽可能小。

注射完毕后，将小鼠放回笼中，并观察小鼠的活力。待小鼠完全苏醒，即可离开动物房。