❶ 什麼是分子印跡技術
第八章 分子印跡技術
將各種生物大分子從凝膠轉移到一種固定基質上的過程稱為印跡技術(blotting)。
Southern在1975年首先提出了分子印漬的概念。他將瓊脂糖凝膠電泳分離的 DNA片段在凝膠中進行變性使其成為單鏈,然後將一張硝酸纖維素(nitrocellulose, NC)膜放在凝膠上,上面放上吸水紙巾,利用毛細管作用原理使凝膠中的DNA片段轉移到 NC膜上,使之成為固相化分子。載有DNA單鏈分子的 NC膜就可以在雜交液與另一種帶有標記的 DNA或RNA分子(即探針)進行雜交,具有互補序列的RNA或DNA結合到存在於 NC膜的 DNA分子上,經放射自顯影或其他檢測技術就可以顯現出雜交分子的區帶。由於這種技術類似於用吸墨紙吸收紙張上的墨跡,因此稱為「blotting」,譯為印跡技術。
生物大分子印跡技術發展極為迅速,己廣泛用於 DNA、RNA、蛋白質的檢測。通常人們將DNA印跡技術稱為Southern blotting,將RNA印跡技術稱為Northern blotting,將蛋白質印跡技術稱為Western blotting,將不經凝膠的印跡技術稱為斑點印跡(Dot blotting)。
❷ 印跡雜交技術數量5是什麼意思
印跡雜交技術數量5是採用印跡雜交技術編號為5的印跡雜交技術進行實驗操作。
印跡雜交,是基因診斷技術的一種,有多種方式:
第一種是Northern印跡雜交,是一種將RNA從瓊脂糖凝膠中轉印到硝酸纖維素膜上的方法。
第二種是Southern印跡雜交,是由凝膠電離經限制性內切酶消化的DNA片段。第三種是Western印跡雜交,是將蛋白樣本通過聚丙烯醯胺電泳按分子量大小分離,再轉移到雜交膜(blot)上,然後通過一抗/二抗復合物對靶蛋白進行特異性檢測的方法。
(2)印跡雜交技術檢查什麼擴展閱讀:
Northern雜交用於分析RNA;Southern雜交用於分析DNA;
Western雜交用於分析蛋白質。
大致過程如下:
(1)酶切DNA,凝膠電泳分離各酶切片段,然後使DNA原位變性。
(2) 將DNA片段轉移到固體支持物(硝酸纖維素濾膜或尼龍膜)上。
(3) 預雜交濾膜,掩蓋濾膜上非特異性位點。
(4) 讓探針與同源DNA片段雜交,然後漂洗除去非特異性結合的探針。
(5) 通過顯影檢查目的DNA所在的位置。
❸ 印跡雜交技術怎麼收費
沒必要,就算看出你有基因缺失,也幹不了什麼,多收費而已!一種染色體檢查技術,主要用來檢查dna。可以用來檢查疾病,進行相關鑒定。
❹ 婦科檢查有必要做印跡雜交技術檢查什麼
印跡雜交技術是種基因檢查技術,用來檢測DNA序列的,常用來檢測各種病毒性疾病
❺ 印跡雜交和核糖核酸dna測序是查什麼的
Northern印跡雜交用於分析RNA
Southern印跡雜交用於分析DNA
Western印跡雜交用於分析蛋白質
核糖核酸是RNA
脫氧核糖核酸才是DNA
測序是為測定基因全序列,預測罹患多種疾病的可能性。
❻ 基因多態性檢測是不是印跡雜交技術
A
BCD都是Southern Bloting的事,E是Northern Blotting,Western只能查蛋白質,也就是基因表達的結果.
❼ 核酸印跡雜交技術的一般步驟有哪些
並介紹了點雜交的基本概念及實驗原理、方法. 幾種核酸雜交技術的比較?點雜交實驗原理、步驟(1)幾種核酸雜交的異同點核酸雜交是分子生物學的基本技術,也是遺傳學研究和基因診斷的常用方法.核酸雜交的形式有多種,其中最常用的是Southern雜交、Northern雜交、原位雜交、點雜交等.雖然形式多樣,但都是基於核酸分子的鹼基互補原理.從雜交材料來看,雜交分為DNA-DNA雜交、DNA-RNA雜交和RNA-RNA雜交.從雜交分子狀態來看,雜交分為液相-固相雜交和液相-液相雜交. 上述幾種雜交都屬於液相-固相雜交,即將參與雜交的一方分子固定在固相的支持載體上,另一方分子以液相形式參與雜交.參與雜交的雙方分子必有一方被標記,以便產生能夠被檢出的雜交信號;在液相-固相雜交中往往液相分子被標記,這樣才能產生有意義的差別信號.在雜交在中,被標記的分子稱為探針,而與探針進行雜交的分子稱為被檢測樣品(被檢分子).大多數液相-固相雜交中被檢樣品往往是混合分子,如提取的基因組DNA或某種組織的RNA,並且將被檢樣品固定在載體上,而探針往往是單一分子,如某一基因的片斷.雜交結果是根據信號的強弱和位置進行判斷,如被檢分子的分子量(或長度),被檢分子的表達強度等.這種雜交適用於相同基因片斷對不同樣品的檢測.若進行一種樣品被不同基因片斷的檢測時,就必須採取反向的方式,即將不同的基因片斷固定在載體上,而將被檢樣品製成液相並進行標記.這種反向的方式稱為反向雜交,反向雜交中被標記的樣品也可以稱為探針. 在液相-固相雜交中固相載體往往採用尼龍膜或醋酸纖維膜,這些經過特殊處理的材料對核酸分子具有強大的吸附力,在操作中不易脫落.探針標記往往採用放射性標記,如32P、35S等,由於放射性物質的危害性,現在非放射性標記也在廣泛使用,如生物素標記、地高辛標記等.一般來說,放射性標記適用於Southern雜交、Northern雜交和點雜交,非放射性標記適用於原位雜交.放射性標記靈敏度高,線形范圍寬,非放射性標記定位性強,沒有衰變,危害小. (2)點雜交的概念點雜交(dot blot)是雜交信號呈現斑點樣的雜交方法,在操作上是把參與雜交的一方分子點樣到膜上.由於雜交分子預先沒有進行像Southern雜交和Northern雜交之前的電泳分離,也沒有像原位雜交那樣,雜交一方的分子已經表現出組織細胞分布的位置特異性,所以點雜交的結果判斷完全視雜交信號的強弱,其信息量沒有其它雜交形式的信息量豐富.但點雜交的操作比較簡單、結果直觀、適用於大批樣品的檢測,因此它在許多方面也得到了廣泛的應用. 一、實驗目的理解核酸雜交原理;熟悉核酸雜交的一般方法,掌握膜斑點雜交技術和結果分析. 二、實驗原理點雜交是核酸雜交中比較簡單的一種技術,本質上也是單鏈核酸分子通過鹼基互補而形成雙鏈核酸的過程,當某單鏈分子被標記後,就可以檢測與其互補的分子. (一)印跡印跡(blot)就是將雜交一方的分子固定在膜上,對於Southern雜交和Northern雜交,往往採用毛細轉移,真空轉移或電轉移等方法,使電泳分離的核酸分子「原位印跡」到膜上去,而點雜交則可採取人工點樣的方法,將核酸分子固定到膜上去.在點膜時還要藉助其它使核酸分子固定的方法(如點膜器、真空抽氣裝置)使分子更緊密地結合在膜上,並且不擴散.點雜交的印跡過程提供了一個固化平台和陣列,使雜交在已知位置上進行. (二)標記標記(labeling)就是使參與雜交的一方分子帶有可識別的物質,使雜交後顯示信號.常用標記物有放射性同位素和非放射性物質,標記方法有隨機引物標記法、缺口平移法和末端標記法等.在液相-固相雜交中,標記往往在液相分子上,使探針成為流動相.標記效率是影響雜交的重要因素,在一定范圍內,比活性(可以理解為單位分子中的標記物數量與活性)越高越好.在雜交中,探針往往是過量的(雜交信號的強弱反映的是被檢樣品的量和基因豐度),所以依靠增加探針量來提高雜交靈敏度的做法很有限的,應該提高探針的比活性.