免疫吸附技術哪裡有

Ⅰ IA免疫吸附療法在銀屑病的應用

IA免疫吸附療法就是將患者的血液引入儲有吸附材料的血液灌流(HP)裝置,去除多餘的a1球蛋白的,除去血漿中與免疫有關的致病因子,維持其正常值,祛除瘙癢,退癬消屑,達到治療銀屑病的目的。通過技術的完善,該技術對銀屑病患者也是一向福利。以上是對IA免疫吸附療法在銀屑病的應用這個問題的建議,希望對您有幫助,祝您健康!

Ⅱ 簡述酶聯免疫吸附實驗有哪些技術類型。

（一）雙抗體夾心法雙抗體夾心法是檢測抗原最常用的方法，操作步驟如下：（1）將特異性抗體與固相載體連接，形成固相抗體：洗滌除去未結合的抗體及雜質。（2）加受檢標本：使之與固相抗體接觸反應一段時間，讓標本中的抗原與固相載體上的抗體結合，形成固相抗原復合物。洗滌除去其他未結合的物質。（3）加酶標抗體：使固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結合。徹底洗滌未結合的酶標抗體。此時固相載體上帶有的酶量與標本中受檢物質的量正相關。（4）加底物：夾心式復合物中的酶催化底物成為有色產物。根據顏色反應的程度進行該抗原的定性或定量。根據同樣原理，將大分子抗原分別制備固相抗原和酶標抗原結合物，即可用雙抗原夾心法測定標本中的抗體。（二）雙位點一步法在雙抗體夾心法測定抗原時，如應用針對抗原分子上兩個不同抗原決定簇的單克隆抗體分別作為固相抗體和酶標抗體，則在測定時可使標本的加入和酶標抗體的加入兩步並作一步（圖15-5）。這種雙位點一步不但簡化了操作，縮短了反應時間，如應用高親和力的單克隆抗體，測定的敏感性和特異性也顯著提高。單克隆抗體的應用使測定抗原的ELISA提高到新水平。在一步法測定中，應注意鉤狀效應（hookeffect），類同於沉澱反應中抗原過剩的後帶現象。當標本中待測抗原濃度相當高時，過量抗原分別和固相抗體及酶標抗體結合，而不再形成夾心復合物，所得結果將低於實際含量。鉤狀效應嚴重時甚至可出現假陰性結果。（三）間接法測抗體間接法是檢測抗體最常用的方法，其原理為利用酶標記的抗抗體以檢測已與固相結合的受檢抗體，故稱為間接法。操作步驟如下：（1）將特異性抗原與固相載體連接，形成固相抗原：洗滌除去未結合的抗原及雜質。（2）加稀釋的受檢血清：其中的特異抗體與抗原結合，形成固相抗原抗體復合物。經洗滌後，固相載體上只留下特異性抗體。其他免疫球蛋白及血清中的雜質由於不能與固相抗原結合，在洗滌過程中被洗去。（3）加酶標抗抗體：與固相復合物中的抗體結合，從而使該抗體間接地標記上酶。洗滌後，固相載體上的酶量就代表特異性抗體的量。例如欲測人對某種疾病的抗體，可用酶標羊抗人IgG抗體。（4）加底物顯色：顏色深度代表標本中受檢抗體的量。本法只要更換不同的固相抗原，可以用一種酶標抗抗體檢測各種與抗原相應的抗體。 （四）競爭法競爭法可用於測定抗原，也可用於測定抗體。以測定抗原為例，受檢抗原和酶標抗原競爭與固相抗體結合，因此結合於固相的酶標抗原量與受檢抗原的量呈反比。操作步驟如下：（1）將特異抗體與固相載體連接，形成固相抗體。洗滌。（2）待測管中加受檢標本和一定量酶標抗原的混合溶液，使之與固相抗體反應。如受檢標本中無抗原，則酶標抗原能順利地與固相抗體結合。如受檢標本中含有抗原，則與酶標抗原以同樣的機會與固相抗體結合，競爭性地佔去了酶標抗原與固相載體結合的機會，使酶標抗原與固相載體的結合量減少。參考管中只加酶標抗原，保溫後，酶標抗原與固相抗體的結合可達最充分的量。洗滌。 （3）加底物顯色：參考管中由於結合的酶標抗原最多，故顏色最深。參考管顏色深度與待測管顏色深度之差，代表受檢標本抗原的量。待測管顏色越淡，表示標本中抗原含量越多。（五）捕獲法測IgM抗體血清中針對某些抗原的特異性IgM常和特異性IgG同時存在，後者會干擾IgM抗體的測定。因此測定IgM抗本多用捕獲法，先將所有血清IgM（包括異性IgM和非特異性IgM）固定在固相上，在去除IgG後再測定特異性IgM。操作步驟如下：（1）將抗人IgM抗體連接在固相載體上，形成固相抗人IgM。洗滌。（2）加入稀釋的血清標本：保溫反應後血清中的IgM抗體被固相抗體捕獲。洗滌除去其他免疫球蛋白和血清中的雜質成分。（3）加入特異性抗原試劑：它只與固相上的特異性IgM結合。洗滌。（4）加入針對特異性的酶標抗體：使之與結合在固相上的抗原反應結合。洗滌。（5）加底物顯色：如有顏色顯示，則表示血清標本中的特異性IgM抗體存在，是為陽性反應。（六）應用親和素和生物素的ELISA親和素是一種糖蛋白，可由蛋清中提取。分子量60kD，每個分子由4個亞基組成，可以和4個生物素分子親密結合。現在使用更多的是從鏈黴菌中提取的鏈霉和素（strepavidin）。生物素（biotin）又稱維生素H，分子量244.31，存在於蛋黃中。用化學方法製成的衍生物，生物素－羥基琥珀亞胺酯（biotin-hydroxysuccinimide，BNHS）可與蛋白質、糖類和酶等多種類型的大小分子形成生物素化的產物。親和素與生物素的結合，雖不屬免疫反應，但特異性強，親和力大，兩者一經結合就極為穩定。由於1個親和素分子有4個生物素分子的結合位置，可以連接更多的生物素化的分子，形成一種類似晶格的復合體。因此把親和素和生物素與ELIS偶聯起來，就可大提高ELISA的敏感度。親和素－生物素系統在ELISA中的應用有多種形式，可用於間接包被，亦可用於終反應放大。可以在固相上先預包被親和素，原用吸附法包被固相的抗體或抗原與生物素結合，通過親和素－生物素反應而使生物素化的抗體或抗在相化。這種包被法不僅可增加吸附的抗體或抗原量，而且使其結合點充分暴露。另外，在常規ELISA中的酶標抗體也可用生物素化的抗體替代，然後連接親和素－酶結合物，以放大反應信號。

Ⅲ 降尿酸免疫吸附，哪裡能做，多少錢一次

目前免疫吸附的吸附柱大致分兩種，一種是一次性的，吸附柱飽和後即棄去，無法再生，每次治療大概可能也許1-1.5萬左右。另一種吸附柱可以反復再生使用，具體的說，吸附柱15分鍾後飽和，再化15分鍾時間在線洗脫再生，如此反復循環，吸附柱本身可能5-6萬（國產和進口價錢不一樣），再加其它費用，一個療程需7-8萬吧。同時吸附柱還可保存，兩年內如疾病復發，還可重復使用。象計程車一樣，用得越多，單次費用越低。

Ⅳ 免疫吸附的基本操作流程

免疫吸附療法的基本操作流程是將患者血液引出體外,建立體外循環並抗凝,血液流經血漿分離器分離出血漿,將血漿引入免疫吸附器與免疫吸附劑接觸,以選擇性吸附的方式清除致病物質,然後將凈化的血漿回輸患者體內,達到治療目的。有的免疫吸附裝置不需要分離血漿,而可直接進行血液灌流式免疫吸附治療。
免疫吸附治療的關鍵部分是吸附柱,包括載體部分、配體部分及兩者間鏈接方式。與吸附對象(致病物質)發生吸附反應的核心部分稱為載體,固定於載體上、具有免疫吸附活性的物質稱為配體,兩者間通過交聯或耦聯的方式相互作用。配體的吸附活性本質是與吸附對象(致病物質)之間的選擇性或特異性親和力,即分子間相互作用,包括生物學親和力(如抗原-抗體反應)和物理化學親和力(如疏水交互作用)。
目前可用於免疫吸附柱配體的物質有葡萄球菌A蛋白、小牛血清、多克隆抗人IgG抗體(Ig-Therasorb吸附)、苯丙氨酸(PH-350和PH-250吸附)、色氨酸(TR- 350吸附)、Medisorba MG-50吸附柱、硫酸葡聚糖纖維素(DSC)、多粘菌素B纖維柱(PMX-F)、直接全血吸附脂蛋白(DALI)、DNA吸附、C1q吸附、抗LDL抗體吸附、糖蛋白吸附、各種解毒戒毒吸附、膽紅質吸附柱(Medisorba BL-300)及各種細胞吸附柱等。
作用機制
清除致病物質
很多疾病都是由循環中的致病因子造成的。這些致病因子包括自身抗體、循環免疫復合物、腫瘤壞死因子、白介素、大量低密度脂蛋白、各種副蛋白、循環毒素和內毒素等。
清除過敏毒素
過敏毒素不僅可激活單核細胞和粒細胞,還可調節毛細血管通透性和血流動力學變化。免疫吸附可延遲過敏毒素對細胞因子釋放的影響和由此產生的擴大炎性反應。
免疫調節作用
免疫吸附可調節患者的免疫功能,使膿毒症患者的白介素1和白介素6合成下降,抑制淋巴細胞增生和減少炎性介質釋放。另外,免疫吸附還可恢復血漿因子、補體、凝血因子和調理因子功能,恢復損傷細胞及網狀內皮細胞的吞噬功能,減少腫瘤細胞的封閉因子,增加腫瘤細胞對化療葯物的敏感性等。
非特異性治療作用
免疫吸附可降低血清中的炎症介質,如補體和纖維蛋白原等。
適應證
免疫吸附的適應證很廣泛,包括:
① 多種風濕免疫病,尤其是系統性紅斑狼瘡和系統性血管炎等。
② 免疫相關性皮膚病。
③ 腎臟疾病,與免疫相關的腎炎,包括紫癜腎、IgA腎病等。
④ 消化系統疾病,如暴發性肝衰竭、原發性膽汁性肝硬化、梗阻性黃疸等。
⑤ 神經系統疾病,如格林-巴利綜合征、重症肌無力和脫髓鞘多發神經病等。
⑥ 血液系統疾病,如冷球蛋白血症、巨球蛋白血症、自身免疫性溶血性貧血及多發性骨髓瘤等。
⑦ 內分泌代謝病,如高脂血症、甲亢危象、肥胖症及Ⅰ型糖尿病等。
⑧ 中毒,如有機磷中毒等。
應用現狀
目前,免疫吸附技術發展已較完善,尤其是採用膜性血漿分離技術後,並發症減少。與過去常用的血漿置換相比,免疫吸附在療效和安全性等方面具有明顯優勢。免疫吸附去除致病性抗體較完全和徹底,回輸給患者的是其自身的血漿,無須補充外源性血漿及置換液,可有效防止傳染病的傳播,還可避免血漿置換中較常見的枸櫞酸鹽中毒、凝血機制異常、過敏反應、低血壓及低鉀血症等。此外,免疫吸附具有高度的選擇性和特異性,不影響同時進行的葯物治療,耗材少,且價格相對便宜,是重症難治性風濕免疫病有發展前途的治療方法。
目前,國內已有醫院開展免疫吸附治療風濕免疫病,免疫吸附對難治性重症系統性紅斑狼瘡、類風濕關節炎、多肌炎/皮肌炎、白塞病及銀屑病關節炎等均有良好的近期療效,總有效率和臨床緩解率達90%以上,配合使用激素和免疫抑制劑則療效持久。

Ⅳ 免疫吸附治療尿毒症的優勢是什麼

免疫吸附技術具有吸附徹底、快速、高效，免疫吸附技術相對於激素治療有它獨特的優勢所在，下面就來對比看下到底優勢何在? 中醫治療尿毒症效果怎麼樣?針對尿毒症平均患病率以每年10%的速度快速增長，石家莊腎病醫院依據「腎臟纖維化是導致各類腎臟病病情惡化進展的一種病理損傷過程」這一原理，逐漸形成了以微化中葯滲透療法「阻斷+修復+重建」腎功能為治療核心;以免疫吸附與血液灌流為核心的血液凈化技術，共同打造石家莊腎病醫院的治療核心優勢。多方位、多途徑、多渠道、多靶點、多系統立體治療的目的。 尿毒症的對代謝的影響如上介紹，要有效最重要的還是針對腎臟損傷進行修復，單純透析只是一種對症消症的方法，並不能從根本上治療腎臟損傷。石家莊腎病醫院依據"腎臟纖維化是導致各類腎臟病病情惡化進展的一種病理損傷過程"這一原理，逐漸形成了以微化中苭滲透療法"阻斷+修復+重建"腎功能為治療核心;以免疫吸附與血液灌流為核心的血液凈化技術，共同打造石家莊腎病醫院的治療核心優勢。多方位、多途徑、多渠道、多靶點、多系統立體治療的目的。尿毒症治療是一項系統工程，只要正確對待，及時治療，有效預防和治療尿毒症是可以做到的。隨著科學技術的發展，我們更傾向於採用微化中葯滲透療法配合免疫吸附來治療尿毒症，通過發揮阻斷、吸附、凈化、修復、重建的治療效果來更好的保護尿毒症患者目前殘存的腎單位，恢復受損腎臟原有的組織和結構！ 中醫治療尿毒症的優勢有什麼?與西醫相比，中醫治療尿毒症有很多優勢所在，既不用開刀，也沒有毒副作用，那麼中醫治療尿毒症究竟有什麼優勢呢? 中醫治療尿毒症的優勢是什麼?那麼有沒有很好的治療尿毒症的方法呢?西醫既然已經沒有很好的治療方法了那麼中醫還有沒有好的治療方法呢?答案是肯定的，我們的國粹中醫可以很好的治療尿毒症。
記得採納啊

Ⅵ 關於「酶標記免疫吸附法」有專家能介紹一下嗎

酶聯免疫吸附法 (ELISA)

酶聯免疫吸附法 (ELISA) 是日前分析化學領域中的前沿課題 , 特別是在食品和飼料中有毒有害物質的檢測應用極為廣泛。

酶聯免疫吸附法的基本原理及特點：

酶聯免疫吸附分析法是把抗原抗體的免疫反應和酶的高效催化作用原理有機地結合起來的一種檢測技術。該技術主要的依據有三點：第一、抗原（抗體）能結合到固相載體的表面仍具有其免役活性；第二、抗體（抗原）與酶結合所形成的結合物仍保持免疫活性和酶的活性；第三，結合物與相應的抗原（抗體）反應後，結合的酶仍能催化底物生成有色物質，而顏色的深淺可定量抗體（抗原）的含量。酶聯免疫吸附分析法主要有三種測定方法：即間接法，抗體夾心法和競爭法。前兩種方法主要用於測定抗體和大分子抗原，適用於臨床診斷上，而競爭法是測定小分子抗原的方法，因而尤其適用於食品衛生分析。由於食品衛生分析中所測定的物質大都是低分子量的，但免疫動物產生抗體的抗原其分子量要求必須很大（至少 50000 ），因此，首先必須將小分子物質結合上高分子蛋白質，才能作免疫之用，而為了能使小分子物質結合上高分子蛋白質，則必須在小分子物質上導入一個活性基團，同時直接競爭法所需的酶標抗原的制備也需首先在小分子物質上導入一個活性基團。
競爭酶聯免疫吸附分析法具有靈敏度高、干擾小、簡便、快速、操作安全、無污染、特異性很強、和測試成本低等特點。

酶聯免疫吸附分析法的應用實例：

黃麴黴毒素 B 1 、 M 1 以及 T-2 毒素等的檢測。黃麴黴毒素 B 1 的酶聯免疫吸附分析法已列入國家標准方法的第二法（ GB/T500.922-1996 ）， F 1 毒素的酶聯免疫吸附分析法已列入國家標准方法（ GB/T14933-1994 ），脫氧雪腐鐮刀菌烯醇國家標准方法為 GB/T14929.5-1994 。
黃麴黴毒素 B 1 的酶聯免疫吸附測定原理：利用固定相酶聯免疫吸附原理，將 AFB 1 特異性抗體包被於聚苯乙烯量反應板的孔穴中，再加入樣品提取液（未知抗原）及酶標 AFB 1 抗原（已知抗原），使兩者與抗體之間進行免疫競爭反應，然後加酶底物顯色，顏色的深淺取決於抗體和酶標 AFB 1 抗原結合的量 , 即樣品中 AFB 1 多，則被抗體結合酶標 AFB 1 抗原少，顏色淺，反之則深，用目測法或儀器法與 AFB 1 標樣比較判斷樣品中 AFB 1 的含量。最低檢測濃度為 0 。 01ug/kg 。

37 O C 0.5h
樣品提取 →試劑制備→免疫反應→顯色反應
37 O C 15min 鍾
目視法 儀器法

結果判斷 →計算含量
鹽酸克倫特羅測定簡介：測定的原理是抗原抗體反應，微孔板包被有針對兔 IgG （克倫特羅抗體）的抗體，克倫特羅抗體液加入，經過孵育及洗滌步驟後，加入 chenbuteol 酶標記物，標准或樣品溶液，克倫特羅與克倫特羅的標記物競爭克倫特羅抗體，沒有連接的克倫特羅酶標記物在洗滌步驟中被除去。將酶基質（過氧化尿素）和發色劑（四甲基聯苯胺）加入到孔中並且孵育，結合的酶標記物將無色的發色劑為藍色的產物，加入反應停止液（ 1M 硫酸）使顏色有藍轉變為黃色，在 450nm 處測定，吸收光強度與樣品中的克倫特羅濃度成反比。
克倫特羅（ Clenbuterol ）屬於興奮劑，一些年來，人們已經知道在畜牧生產中，適用於作改良劑，特別是改進脂肪型動物的肉與脂肪的比例或加速動物生長，然而直到現在這些化合物並沒有被批准作為合法的加速生長調節劑，一些商家因利益驅使非法在飼料中添加「瘦肉精」鹽酸克倫特羅，這給人民的生活帶來了極大的安全隱患，鹽酸克倫特羅主要殘留在動物內臟一肝、腎、肺等，食用含鹽酸克倫特羅的內臟會引起中毒。

酶聯免疫檢測技術的應用現狀和發展前景

酶聯免疫檢測技術的應用
真菌毒素的檢測：黃麴黴毒素 B 1 、 M 1 以及 T-2 毒素，脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（嘔吐毒素 DON ），二乙醯草鐮刀菌烯醇（ DAS ），玉米赤霉烯酮，赫麴黴毒素 A （ OA ）。
農葯的檢測：主要有除草劑與殺蟲劑兩大類，例如殺暝松（ FN ）、甲氟磷酸異已酶（ SOMAN ）、草不綠（ Alachor ）、西維因（ Carbaryl ）、多菌靈及克菌丹（ Captan ）等。
其他類的檢測：鹽酸克倫特羅，河豚毒素，植物毒素如罌粟鹼、嗎啡、藻類毒素，苯並（ a ）芘，抗生素，激素類以及一些營養物質和食品添加劑如麩蛋白（ Gliaclin ），醬油蛋白（ Soy protein ），花生蛋白（ Peanut protein ），牛乳清蛋白（ Borine Whey Protein ）等。
隨著食品工業的發展，對分析檢測的要求越來越高，從而也使 ELISA 方法將更趨完善。一方面為提高 ELISA 方法的靈敏度和特異性，制備單克隆抗體的技術的發展，將和 ELISA 法互相結合，從而使食品衛生分析達到 DNA 分子結構水平，促使食品工業的健康發展。

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Ⅶ IA免疫吸附技術治療風濕性關節炎好嗎

IA免疫吸附技術治療風濕性關節炎效果很好，鄭州痛風風濕病醫院引進該技術。
IA免疫吸附技術目前發展較完善，尤其是採用膜性分離技術後並發症減少。對血液中致病因子清除的選擇性達到更高;對血漿中有用成分的丟失范圍與數量更小。
IA免疫吸附技術在去除致病性抗體上較完全和徹底，回輸給患者的是其自身清除致病因子後的血漿，無須補充外源性血漿及置換液，可有效防止傳染病的傳播，還可避免血漿置換中較常見的枸櫞酸鹽中毒、凝血機制異常、過敏反應、低血壓及低鉀血症等。
IA免疫吸附技術具有高度的選擇性和特異性，幾乎不丟失血漿有用成分，不僅具有令人滿意的治療效果，同時避免了血漿制劑的輸入及其相關的各種不良影響。不影響同時進行的葯物治療，耗材少，且價格相對便宜，是重症難治性風濕病有發展前途的治療方法。

Ⅷ 常用的免疫學技術有哪些

以下是幾種常用的免疫學技術：

1．免疫熒光技術免疫熒光技術是利用熒光素標記的抗體（或抗原）檢測組織、細胞或血清中的相應抗原（或抗體）的方法.由於熒光抗體具有安全、靈敏的特點,因此已廣泛應用在免疫熒光檢測和流式細胞計數領域.根據熒光素標記的方式不同,可分為直標熒光抗體和間標熒光抗體.間標熒光抗體中一抗並不直接連接熒光素,而是先將一抗結合到蛋白,然後帶有熒光素的二抗再結合至一抗.通過二抗的結合,能將信號進行放大,因此能在一定程度上提高檢測的靈敏度,但是隨之帶來的高背景也降低了檢測的特異性.近年來,隨著熒光素和熒光檢測技術的不斷進步,熒光檢測的靈敏度已經接近同位素檢測的水平,直接標記的熒光抗體逐漸取代間接標記抗體.這些標記了熒光素的抗體直接結合至抗原,大大提高了檢測的特異性,使檢測的結果更加准確可靠.熒光檢測技術的發展,使得免疫熒光技術在傳染病診斷上有廣泛的用途,如在細菌、病毒、螺旋體感染的疾病,檢查IgM抗體,做為近期接觸抗原的標志.利用單克隆熒光直接標記抗體鑒定淋巴細胞的亞類.通過流式細胞儀,針對細胞表面不同抗原,可以同時使用多種不同的熒光抗體,對同一細胞進行多標記染色.

2．放射免疫檢測放射免疫檢測技術是目前靈敏度最高的檢測技術,利用放射性同素標記抗原（或抗體）,與相應抗體（或抗原）結合後,通過測定抗原抗體結合物的放射性檢測結果.放射性同位素具有pg級的靈敏度,且利用反復曝光的方法可對痕量物質進行定量檢測.但放射性同位素對人體的損傷也限制了該方法的使用.

3．酶聯免疫吸附試驗（ELISA）酶聯免疫檢測是目前應用最廣泛的免疫檢測方法.該方法是將二抗標記上酶,抗原抗體反應的特異性與酶催化底物的作用結合起來,根據酶作用底物後的顯色顏色變化來判斷試驗結果,其敏感度可達ng水平.常見用於標記的酶有辣根過氧化物酶(HRP)、鹼性磷酸酶（AP）等.由於酶聯免疫法無需特殊的儀器,檢測簡單,因此被廣泛應用於疾病檢測.常用的方法有間接法、夾心法以及BAS－ELISA.間接法是先將待測的蛋白抱被在孔板內,然後依次加入一抗、標記了酶的二抗和底物顯色,通過儀器（例如酶標儀）定量檢測抗原.這種方法操作簡單但由於高背景而特異性較差.目前已逐漸被夾心法取代.夾心法利用二種一抗對目標抗原進行捕獲和固定,在確保靈敏度的同時大大提高了反應的特異性.近年來,抗原的定量檢測技術也不斷推陳出新.近年來,在夾心法ELISA的基礎上,開發了多抗原檢測試劑盒,能同時檢測微量液相樣本中多個抗原含量.這項技術的應用大大縮短了診斷的時間,提高診斷的可靠性和及時性.

4．免疫金膠體技術膠體金技術經過30多年的發展到現在已日趨成熟,該方法是將二抗標記上膠體金顆粒,利用抗原抗體間的特異性反應,最終將膠體金標記的二抗吸附於滲濾膜上,此方法簡單,快速,廣泛應用於臨床篩查.

Ⅸ 酶聯免疫吸附分析法主要有哪三種

雙抗體夾心法

雙抗體夾心法是檢測抗原最常用的方法，操作步驟如下：

雙抗體夾心法

一、將特異性抗體與固相載體連接，形成固相抗體：洗滌除去未結合的抗體及雜質。

二、加受檢標本：使之與固相抗體接觸反應一段時間，讓標本中的抗原與固相載體上的抗體結合，形成固相抗原復合物。洗滌除去其他未結合的物質。

三、加酶標抗體：使固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結合。徹底洗滌未結合的酶標抗體。此時固相載體上帶有的酶量與標本中受檢物質的量正相關。

四、加底物：夾心式復合物中的酶催化底物成為有色產物。根據顏色反應的程度進行該抗原的定性或定量。

根據同樣原理，將大分子抗原分別制備固相抗原和酶標抗原結合物，即可用雙抗原夾心法測定標本中的抗體。

在臨床檢驗中，此法適用於檢驗各種蛋白質等大分子抗原，例如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。只要獲得針對受檢抗原的異性抗體，就可用於包被固相載體和制備酶結合物而建立此法。如抗體的來源為抗血清，包被和酶標用的抗體最好分別取自不同種屬的動物。如應用單克隆抗體，一般選擇兩個針對抗原上不同決定簇的單抗，分別用於包被固相載體和制備酶結合物。這種雙位點夾心法具有很高的特異性，而且可以將受檢標本和酶標抗體一起保溫反應，作一步法檢測。

在一步法測定中，當標本中受檢抗原的含量很高時，過量抗原分別和固相抗體及酶標抗體結合，而不再形成"夾心復合物"。類同於沉澱反應中抗原過剩的後帶現象，此時反應後顯色的吸光值（位於抗原過剩帶上）與標准曲線（位於抗體過剩帶上）某一抗原濃度的吸光值相同，如按常法測讀，所得結果將低於實際的含量，這種現象被稱為鉤狀效應（hook effect），因為標准曲線到達高峰後呈鉤狀彎落。鉤狀效應嚴重時，反應甚至可不顯色而出現假陰性結果。因此在使用一步法試劑測定標本中含量可異常增高的物質（例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等）時，應注意可測范圍的最高值。用高親和力的單克隆抗體制備此類試劑可削弱鉤狀效應。

假使在被測分子的不同位點上含有多個相同的決定簇，例如HBsAg的a決定簇，也可用針對此決定的同一單抗分別包被固相和制備酶結合物。但在HBsAg的檢測中應注意亞型問題，HBsAg有adr、adw、ayr、ayw4個亞型，顯然每種亞型均有相同的a決定簇的反應性，這也是用單抗作夾心法應注意的問題。

雙抗體夾心法測抗原的另一注意點是類風濕因子（RF）的干擾。RF是一種自身抗體，多為IgM型，能和多種動物IgG的Fc段結合。用作雙抗體夾心法檢測的血清標本中如含有RF，它可充當抗原成份，同時與固相抗體和酶標抗體結合，表現出假陽性反應。採用F（ab'）或Fab片段作酶結合物的試劑，由於去除了Fc段，從而可消除RF的干擾。雙抗體夾心法ELISA試劑是否受RF的影響，已被列為這類試劑的一項考核指標（參見6.2）。

雙抗體夾心法適用於測定二價或二價以上的大分子抗原，但不適用於測定半抗原及小分子單價抗原，因其不能形成兩位點夾心。

雙抗原夾心法測抗體

反應模式與雙抗體夾心法類似。用特異性抗原進行包被和制備酶結合物，以檢測相應的抗體。與間接法測抗體的不同之處為以酶標抗原代替酶標抗抗體。此法中受檢標本不需稀釋，可直接用於測定，因此其敏感度相對高於間接法。乙肝標志物中抗HBs的檢測常採用本法。本法關鍵在於酶標抗原的制備，應根據抗原結構的不同，尋找合適的標記方法。

雙位點一步法

在雙抗體夾心法測定抗原時，如應用針對抗原分子上兩個不同抗原決定簇的單克隆抗體分別作為固相抗體和酶標抗體，則在測定時可使標本的加入和酶標抗體的加入兩步並作一步。這種雙位點一步不但簡化了操作，縮短了反應時間，如應用高親和力的單克隆抗體，測定的敏感性和特異性也顯著提高。單克隆抗體的應用使測定抗原的ELISA提高到新水平。

在一步法測定中，應注意鉤狀效應（hookeffect），類同於沉澱反應中抗原過剩的後帶現象。當標本中待測抗原濃度相當高時，過量抗原分別和固相抗體及酶標抗體結合，而不再形成夾心復合物，所得結果將低於實際含量。鉤狀效應嚴重時甚至可出現假陰性結果。

間接法測抗體

間接法

間接法是檢測抗體最常用的方法，其原理為利用酶標記的抗體以檢測已與固相結合的受檢抗體，故稱為間接法。操作步驟如下：

⑴將特異性抗原與固相載體連接，形成固相抗原：洗滌除去未結合的抗原及雜質。

⑵加稀釋的受檢血清：其中的特異抗體與抗原結合，形成固相抗原抗體復合物。經洗滌後，固相載體上只留下特異性抗體。其他抗體及血清中的雜質由於不能與固相抗原結合，在洗滌過程中被洗去。

⑶加酶標抗抗體：與固相復合物中的抗體結合，從而使該抗體間接地標記上酶。洗滌後，固相載體上的酶量就代表特異性抗體的量。例如欲測人對某種疾病的抗體，可用酶標羊抗人IgG抗體。

⑷加底物顯色：顏色深度代表標本中受檢抗體的量。

本法主要用於對病原體抗體的檢測而進行傳染病的診斷。間接法的優點是只要變換包被抗原就可利用同一酶標抗抗體建立檢測相應抗體的方法。

間接法成功的關鍵在於抗原的純度。雖然有時用粗提抗原包被也能取得實際有效的結果，但應盡可能予以純化，以提高試驗的特異性。特別應注意除去能與一般健康人血清發生反應的雜質，例如以E.Coli為工程酶的重組抗原，如其中含有E.Coli成份，很可能與受過E.Coli感染者血清中的抗E.Coli抗體發生反應。抗原中也不能含有與酶標抗人Ig反應的物質，例如來自人血漿或人體組織的抗原，如不將其中的Ig去除，試驗中也發生假陽性反應。另外如抗原中含有無關蛋白，也會因競爭吸附而影響包被效果。

間接法中另一種干擾因素為正常血清中所含的高濃度的非特異性抗體。病人血清中受檢的特異性IgG只佔總IgG中的一小部分。IgG的吸附性很強，非特異IgG可直接吸附到固相載體上，有時也可吸附到包被抗原的表面。因此在間接法中，抗原包被後一般用無關蛋白質（例如牛血清蛋白）再包被一次，以封閉（blocking）固相上的空餘間隙。另外，在檢測過程中標本須先行稀釋（1:40~1:200），以避免過高的陰性本底影響結果的判斷。

競爭法

競爭法可用於測定抗原，也可用於測定抗體。以測定抗原為例，受檢抗原和酶標抗原競爭與固相抗體結合，因此結合於固相的酶標抗原量與受檢抗原的量呈反比。操作步驟如下：

⑴將特異抗體與固相載體連接，形成固相抗體。洗滌。

⑵待測管中加受檢標本和一定量酶標抗原的混合溶液，使之與固相抗體反應。如受檢標本中無抗原，則酶標抗原能順利地與固相抗體結合。如受檢標本中含有抗原，則與酶標抗原以同樣的機會與固相抗體結合，競爭性地佔去了酶標抗原與固相載體結合的機會，使酶標抗原與固相載體的結合量減少。參考管中只加酶標抗原，保溫後，酶標抗原與固相抗體的結合可達最充分的量。洗滌。

⑶加底物顯色：參考管中由於結合的酶標抗原最多，故顏色最深。參考管顏色深度與待測管顏色深度之差，代表受檢標本抗原的量。待測管顏色越淡，表示標本中抗原含量越多。一般情況，是通過方波伏安法，檢測培養體系的峰電流，通過峰電流與抗原抗體的線性關系來最終確定體系的最終檢測目標的濃度。

當抗原材料中的干擾物質不易除去，或不易得到足夠的純化抗原時，可用此法檢測特異性抗體。其原理為標本中的抗體和一定量的酶標抗體競爭與固相抗原結合。標本中抗體量越多，結合在固相上的酶標抗體愈少，因此陽性反應呈色淺於陰性反應。如抗原為高純度的，可直接包被固相。如抗原中會有干擾物質，直接包被不易成功，可採用捕獲包被法，即先包被與固相抗原相應的抗體，然後加入抗原，形成固相抗原。洗滌除去抗原中的雜質，然後再加標本和酶標抗體進行競爭結合反應。競爭法測抗體有多種模式，可將標本和酶標抗體與固相抗原競爭結合，抗HBc ELISA一般採用此法。另一種模式為將標本與抗原一起加入到固相抗體中進行競爭結合，洗滌後再加入酶標抗體，與結合在固相上的抗原反應。抗HBe的檢測一般採用此法。

捕獲法

血清中針對某些抗原的特異性IgM常和特異性IgG同時存在，後者會干擾IgM抗體的測定。因此測定IgM抗體多用捕獲法，先將所有血清IgM（包括異性IgM和非特異性IgM）固定在固相上，在去除IgG後再測定特異性IgM。操作步驟如下：

⑴將抗人IgM抗體連接在固相載體上，形成固相抗人IgM。洗滌。

⑵加入稀釋的血清標本：保溫反應後血清中的IgM抗體被固相抗體捕獲。洗滌除去其他免疫球蛋白和血清中的雜質成分。

⑶加入特異性抗原試劑：它只與固相上的特異性IgM結合。洗滌。

⑷加入針對特異性的酶標抗體：使之與結合在固相上的抗原反應結合。洗滌。

⑸加底物顯色：如有顏色顯示，則表示血清標本中的特異性IgM抗體存在，是為陽性反應。

Ⅹ 簡述酶聯免疫吸附實驗有哪些技術類型

酶聯免疫吸附試驗 酶聯免疫吸附試驗 (以下簡稱ELISA) ：是酶免疫測定技術中應用最廣的技術.其基本方法是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體 ( 聚苯乙烯微量反應板 ) 表面,使酶標記的抗原抗體反應在固相表面進行,用洗滌法將液相中的游離成分洗除.常用的 ELISA 法有雙抗體夾心法和間接法,前者用於檢測大分子抗原,後者用於測定特異抗體. 自從Engvall和Perlman（1971）首次報道建立酶聯免疫吸附試驗（Enzyme-Linked ImmunosorbentAssays, ELISA）以來,由於ELISA具有快速、敏感、簡便、易於標准化等優點,使其得到迅速的發展和廣泛應用 .盡管早期的ELISA由於特異性不夠高而妨礙了其在實際中應用的步伐,但隨著方法的不斷改進、材料的不斷更新,尤其是採用基因工程方法制備包被抗原,採用針對某一抗原表位的單克隆抗體進行阻斷ELISA試驗,都大大提高了ELISA的特異性,加之電腦化程度極高的ELISA檢測儀的使用,使ELISA更為簡便實用和標准化,從而使其成為最廣泛應用的檢測方法之一. 目前ELISA方法已被廣泛應用於多種細菌和病毒等疾病的診斷.在動物檢疫方面,ELISA在豬傳染性胃腸炎、牛副結核病、牛傳染性鼻氣管炎、豬偽狂犬病、藍舌病等的診斷中已為廣泛採用的標准方法.