❶ 常用的核酸分子標志物有哪些
1. 放射性核素標記物是當前使用最頻繁的探針標記物。這些探針的靈敏度極高,能夠檢測到10^-14至10^-18克的物質,在最優條件下甚至能測量到樣品中少於1000個核酸分子。在Southern印跡雜交中,通常使用^32P作為標記核素,而不同的標記技術需要選擇合適的核素標記方向:大多數標記方法需要的是α-^32P,而^5'末端標記則必須使用γ-^32P。
2. 非放射性標記物是科學家們多年來尋找的安全、可靠且靈敏的替代放射性核素的物質。這些標記物已經在國內外逐步推廣使用,其優勢在於無放射性污染,可以長期儲存,更適合於臨床診斷等應用。然而,這些標記物的靈敏度和特異性仍有待提高。根據檢測方法的不同,非放射性標記物可以分為四類:
(1) 半抗原:如生物素(biotin)和地高辛(DIG),它們可以與特定抗體結合,通過顯色反應來檢測雜交信號。這兩種物質是目前廣泛使用的非核素標記物。
(2) 配體:生物素不僅是半抗原,還可以與親和素結合用於檢測雜交信號。
(3) 熒光素:例如FITC和羅丹明類,它們能夠發出紫色熒光供觀察使用,主要適用於細胞原位雜交。
(4) 化學發光探針:某些標記物能夠與特定物質反應產生化學發光,類似於核素,可以直接使X線膠片上的乳膠顆粒感光。化學發光探針可能是未來非核素標記物研究的主要趨勢。