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pcr技術用什麼原理

發布時間:2024-07-27 15:58:43

1. PCR技術的原理

PCR技術原理是:先將含有所需擴增分析序列的靶DNA雙鏈經熱變性處理解開為兩個寡聚核苷酸單鏈,然後加入一對根據已知DNA序列由人工合成的與所擴增的DNA兩端鄰近序列互補的寡聚核苷酸片段作為引物,即左右引物。

此引物范圍就在包括所欲擴增的DNA片段,一般需20-30個鹼基對,過少則難保持與DNA單鏈的結合。引物與互補DNA結合後,以靶DNA單鏈為模板,經反鏈雜交復性(退火)。

在TaqDNA聚合酶的作用下以4種三磷酸脫氧核苷(dNTP)為原料按5'到3'方向將引物延伸、自動合成新的DNA鏈、使DNA重新復製成雙鏈。然後又開始第二次循環擴增。

(1)pcr技術用什麼原理擴展閱讀:

PCR技術由Cetus公司和加利福尼亞大學1985年聯合創造的,主要貢獻者為KaryBmulis和HeneryA、Erlich。該方法首先被應用於人β-珠蛋白DNA的擴增及鐮刀狀紅細胞貧血病的產前診斷。

自85年首次報道PCR方法以來,PCR被廣泛應用於分子克隆、序列分析、基因突變、遺傳病、傳染病、性傳播性疾病及法醫判定和考古研究等多領域、並發揮了越來越大的作用。因而發明人KaryB、mulis獲1993年諾貝爾化學獎。

2. pcr原理是什麼

PCR技術的基本原理類似於DNA的天然復制過程,其特異性依賴於與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。

雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解旋成單鏈,在DNA聚合酶的參與下,根據鹼基互補配對原則復製成同樣的兩分子拷貝。

在實驗中發現,DNA在高溫時也可以發生變性解鏈,當溫度降低後又可以復性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復性,加入設計引物,DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。



(2)pcr技術用什麼原理擴展閱讀:

PCR產物的生成量是以指數方式增加的,能將皮克(pg=10-12)量級的起始待測模板擴增到微克(μg=-6)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU;在細菌學中最小檢出率為3個細菌。

引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循鹼基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及TaqDNA聚合酶耐高溫性,使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行。

結合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區,其特異性程度就更高。

3. 綆榪皃cr鎶鏈鐨勫師鐞

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4. pcr技術的原理是什麼

PCR技術的基本原理類似於DNA天然復制的一個過程,pcr技術的特異性主要是依賴於與靶序列的寡核苷酸引物。PCR技術其實是一種體外的DNA 產生擴增的技術,是在模板DNA、引物和4種脫氧核苷酸存在的條件下,依賴於DNA聚合酶的酶促合反應,將需要被擴增的DNA片段與其兩側互補的寡核苷酸鏈引物經過一系列反應的多次循環,然後使DNA的片段在數量上可以增加,從而就可以在較短的時間內獲得我們所需的特定的基因片段。

(4)pcr技術用什麼原理擴展閱讀:

Pcr技術具有特異性強、靈敏度高、簡便快速、純度要求低等特點。PCR產物的生成量是以指數方式增加的,PCR的靈敏度可達3個RFU;在細菌學中最小檢出率為3個細菌。PCR反應用耐高溫的聚合酶,一般在2-4 小時就可以完成擴增反應。而且不需要分離病毒或者是細菌及培養細胞等過程,DNA的粗製品以及RNA均可以作為擴增的模板。而且可直接用臨床的標本如血液、洗嗽液、毛發、活組織等DNA的擴增檢測。

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