進行pcr技術需要的條件是什麼

❶ PCR鎶鏈鎵╁濪NA,闇瑕佺殑鏉′歡鏄

銆愮瓟妗堛慉
銆愮瓟妗堣В鏋愩戣瘯棰樺垎鏋愶細
鈶犵洰鐨勫熀鍥犳彁渚涙ā鏉匡紱
鈶′竴瀵瑰紩鐗╋紱
鈶㈠洓縐嶈劚姘ф牳鑻烽吀浣滀負鍘熸枡錛
鈶ｇ儹紼沖畾DNA鑱氬悎閰朵粠寮曠墿寮濮嬩簰琛ラ摼鐨勫悎鎴愶紱絳旀堥堿銆
鑰冪偣錛歅CR鎶鏈鐨勬潯浠躲
鐐硅瘎錛氬熀紜鐭ヨ瘑鑰冩煡錛屽熀鏈姒傚康鐨勮瘑璁般

❷ pcr的反應條件是什麼

PCR反應條件為溫度、時間和循環次數。

溫度與時間的設置：基於PCR原理三步驟而設置變性-退火-延伸三溫度點。在標准反應中採用三溫度點法，雙鏈DNA在90～95℃變性，再迅速冷卻至40 ～60℃，引物退火並結合到靶序列上，然後快速升溫至70～75℃，在Taq DNA 聚合酶的作用下，使引物鏈沿模板延伸。對於較短靶基因（長度為100～300bp時）可採用二溫度點法，除變性溫度外、退火與延伸溫度可合二為一，一般採用94℃變性，65℃左右退火與延伸（此溫度Taq DNA酶仍有較高的催化活性）。

①變性溫度與時間：變性溫度低，解鏈不完全是導致PCR失敗的最主要原因。一般情況下，93℃～94℃lmin足以使模板DNA變性，若低於93℃則需延長時間，但溫度不能過高，因為高溫環境對酶的活性有影響。此步若不能使靶基因模板或PCR產物完全變性，就會導致PCR失敗。

②退火（復性）溫度與時間：退火溫度是影響PCR特異性的較重要因素。變性後溫度快速冷卻至40℃～60℃，可使引物和模板發生結合。由於模板DNA 比引物復雜得多，引物和模板之間的碰撞結合機會遠遠高於模板互補鏈之間的碰撞。退火溫度與時間，取決於引物的長度、鹼基組成及其濃度，還有靶基序列的長度。對於20個核苷酸，G+C含量約50%的引物，55℃為選擇最適退火溫度的起點較為理想。引物的復性溫度可通過以下公式幫助選擇合適的溫度：

Tm值（解鏈溫度）=4（G+C）＋2（A+T）

復性溫度=Tm值-（5～10℃）

在Tm值允許范圍內，選擇較高的復性溫度可大大減少引物和模板間的非特異性結合，提高PCR反應的特異性。復性時間一般為30～60sec，足以使引物與模板之間完全結合。

③延伸溫度與時間：Taq DNA聚合酶的生物學活性：

70～80℃ 150核苷酸/S/酶分子

70℃ 60核苷酸/S/酶分子

55℃ 24核苷酸/S/酶分子

高於90℃時，DNA合成幾乎不能進行。

PCR反應的延伸溫度一般選擇在70～75℃之間，常用溫度為72℃，過高的延伸溫度不利於引物和模板的結合。PCR延伸反應的時間，可根據待擴增片段的長度而定，一般1Kb以內的DNA片段，延伸時間1min是足夠的。3～4kb的靶序列需3～4min；擴增10Kb需延伸至15min.延伸進間過長會導致非特異性擴增帶的出現。對低濃度模板的擴增，延伸時間要稍長些。

循環次數循環次數決定PCR擴增程度。PCR循環次數主要取決於模板DNA的濃度。一般的循環次數選在30～40次之間，循環次數越多，非特異性產物的量亦隨之增多。

❸ 高中生物PCR技術需要條件是高溫和什麼

所需條件:1.雙鏈DNA模板
2.熱穩定DNA聚合酶(Taq酶)(由台灣科學家錢嘉韻在美國黃石公園熱泉嗜熱菌體內首次發現)
3.引物(一小段有著特定序列的DNA或RNA)
4.四種脫氧核糖核苷酸
5.解鏈(變性)溫度:90~95'C
引物結合(復性)溫度:55~60'C
合成(延伸)溫度:70~75'C

❹ PCR鎶鏈鎵╁濪NA錛岄渶瑕佺殑鏉′歡鏄錛堬級銆傗憼鐩鐨勫熀鍥犫憽寮曠墿鈶㈠洓縐嶈劚姘ф牳鑻烽吀鈶DNA鑱氬悎閰剁瓑鈶mRNA鈶ユ牳緋栦綋

銆愮瓟妗堛戱細A
A[瑙ｆ瀽]PCR鎶鏈闇瑕佺洰鐨勫熀鍥犱綔涓烘墿澧炵殑妯℃澘錛孌NA鑱氬悎閰跺偓鍖栧弽搴旂殑榪涜岋紝鑰屽紩鐗╂槸婊¤凍DNA鑱氬悎閰惰搗浣滅敤鐨勯渶瑕侊紝鍥涚嶈劚姘ф牳鑻烽吀鏄璇ヨ繃紼嬬殑鍘熸枡銆傜患涓婃墍榪幫紝A姝ｇ『銆

❺ PCR實驗室的條件

1、必須擁有標準的的PCR熒光實驗室;
實時熒光定量PCR技術於1996年由美國Applied Biosystems公司推出
由於該技術不僅實現了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規PCR相比，它
有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，目前已得到廣
泛應用。本文試就其定量原理、方法及參照問題作一介紹
2、檢測設備必須符合標准PCR熒光實驗室設置要求;
熒光定量PCR儀+實時熒光定量試劑+通用電腦+自動分析軟體，構成PCR-DNA/RNA實時熒光定量檢測系統。
3、必須通過國家臨床檢驗中心的驗收和認證;4、檢測人員必須通過國家臨檢中心業務培訓並取得合格證書;
PCR實驗室內工作人員必須參加由國家衛生部或各省臨床檢驗中心舉辦的臨床基因擴增培訓班，並持證上崗。PCR實驗室通過驗收，實驗室至少必須應有兩個以上持有「臨床基因檢測上崗證」。PCR實驗室必須建立嚴格的實驗室管理制度、建立標准化操作程序（SOP）、建立系列質量管理文件等，確保實驗室日常運行符合國家衛生部的要求，確保檢測結果准確、確保實驗室衛生安全，確保實驗室長期穩定運行
5、必須在無菌無塵環境下進行操作