分子生物學技術有哪些

㈠ 分子生物學的研究方法有哪些

分子生物學（molecular biology ）：從分子水平上研究生命現象物質基礎的學科。研究細胞成分的物理、化學的性質和變化以及這些性質和變化與生命現象的關系，如遺傳信息的傳遞，基因的結構、復制、轉錄、翻譯、表達調控和表達產物的生理功能，以及細胞信號的轉導等。

分子生物學中最基本的技術是蛋白質的表達和純化。首先是編碼目的蛋白的DNA序列被克隆（用PCR技術和限制性內切酶）到作為表達載體的質粒中。隨後構建好的質粒被引入到宿主細胞。編碼序列在質粒上的特殊的啟動子元件的驅動下，被宿主細胞的表達系統所表達。質粒上通常還帶有抗生素抗性標簽以便於質粒篩選。

質粒可以被插入到細菌或動物細胞。外源DNA被引入細菌被稱為轉化，可以通過電穿孔法、微注射法、正吸收和融合來實現；外源DNA被引入真核細胞，如動物細胞，被稱為轉染，轉染技術包括磷酸鈣法、脂質體法和一些有專利權的商用轉染試劑。DNA也可以以病毒或病原菌為載體被帶入宿主細胞；應用這種病毒或病菌的轉染技術於細胞時，用術語來說就是「對細胞進行轉導（transce）」。

多聚酶鏈式反應(PCR)是一項用於體外復制DNA的極為通用的技術。簡而言之，PCR技術可以使單鏈DNA被復制數百萬次，也允許用事先確定好的方式對被復制的DNA序列進行改動。例如，PCR技術可以用於引入限制性酶切位點，或者對特定的DNA鹼基進行突變（改變）。PCR技術還可以用於從cDNA文庫獲得特定的DNA片斷，或者從另一個角度，用於判斷一個cDNA文庫中是否含有特定的DNA片斷。

凝膠電泳是分子生物學最主要的一項技術。其基本原理是：DNA、RNA和蛋白質可以用電場來進行分離。在瓊脂糖凝膠電泳中，DNA和RNA可以被瓊脂糖凝膠按其分子大小進行分離。同樣，蛋白質可以被SDS－聚丙烯醯胺凝膠電泳（SDS-PAGE）按分子量大小分離；此外，蛋白質還可以由於所帶電荷的不同被等電聚焦電泳分離。

㈡ 現代分子生物學研究的主要內容有哪幾方面

現代分子生物學研究主要內容有：
DNA重組技術（基因工程）
基因表達的調控
生物大分子的結構和功能研究
基因組、功能基因組與生物信息學研究

㈢ 分子生物學常用的技術方法

pCR技術，DNA分子雜交技術等

㈣ 原生質體的分子生物學有哪些技術

隨著對大量分子標記技術（如RFLP、AFLP、RAPD和微衛星等）的利用，已經可以進行雜種鑒定，葉綠體DNA和線粒體DNA的特異性限制性圖譜已經用於鑒定體細胞雜種。

這些是基於DNA基礎上比較准確的分析方法，不會受到環境因素的影響，如RFLP標記、PCR技術已被用於馬鈴薯和番茄體細胞雜種的鑒定。值得注意的是體細胞雜交尚存在一些問題：親緣關系越遠，染色體排斥丟失的現象就越嚴重；由於是兩個物種的全部遺傳物質的合並，各種基因都在其中，選擇符合需要的個體難度大；有時缺乏選擇雜種細胞的有效方法。

因此目前整體對稱融合的工作比較少，而是採用非對稱融合，即一方親本包括了全部遺傳物質，另一方親本只取一部分遺傳物質，如用不具有核的原生質體與之進行融合。

㈤ 分子生物學的研究范圍有哪些

分子生物學主要包含以下三部分研究內容：
1.核酸的分子生物學
核酸的分子生物學研究核酸的結構及其功能。由於核酸的主要作用是攜帶和傳遞遺傳信息，因此分子遺傳學（moleculargenetics）是其主要組成部分。由於50年代以來的迅速發展，該領域已形成了比較完整的理論體系和研究技術，是目前分子生物學內容最豐富的一個領域。研究內容包括核酸/基因組的結構、遺傳信息的復制、轉錄與翻譯，核酸存儲的信息修復與突變，基因表達調控和基因工程技術的發展和應用等。遺傳信息傳遞的中心法則（centraldogma）是其理論體系的核心。
2.蛋白質的分子生物學
蛋白質的分子生物學研究執行各種生命功能的主要大分子──蛋白質的結構與功能。盡管人類對蛋白質的研究比對核酸研究的歷史要長得多，但由於其研究難度較大，與核酸分子生物學相比發展較慢。近年來雖然在認識蛋白質的結構及其與功能關系方面取得了一些進展，但是對其基本規律的認識尚缺乏突破性的進展。
3.細胞信號轉導的分子生物學
細胞信號轉導的分子生物學研究細胞內、細胞間信息傳遞的分子基礎。構成生物體的每一個細胞的分裂與分化及其它各種功能的完成均依賴於外界環境所賦予的各種指示信號。在這些外源信號的刺激下，細胞可以將這些信號轉變為一系列的生物化學變化，例如蛋白質構象的轉變、蛋白質分子的磷酸化以及蛋白與蛋白相互作用的變化等，從而使其增殖、分化及分泌狀態等發生改變以適應內外環境的需要。信號轉導研究的目標是闡明這些變化的分子機理，明確每一種信號轉導與傳遞的途徑及參與該途徑的所有分子的作用和調節方式以及認識各種途徑間的網路控制系統。信號轉導機理的研究在理論和技術方面與上述核酸及蛋白質分子有著緊密的聯系，是當前分子生物學發展最迅速的領域之一。

㈥ 分子生物學的技術有哪些 原理

隨著生命科學和化學的不斷發展，人們對生物體的認知已經逐漸深入到微觀水平。從單個的生物體到器官到組織到細胞，再從細胞結構到核酸和蛋白的分子水平，人們意識到可以通過檢測分子水平的線性結構（如核酸序列），來橫向比較不同物種，同物種不同個體，同個體不同細胞或不同生理（病理）狀態的差異。這就為生物學和醫學的各個領域，提供了一個強有力的技術平台。
分子生物學技術：可應用於遺傳性疾病的研究和病原體的檢測及腫瘤的病因學、發病學、診斷和治療等方面的研究提高到了基因分子水平。
生物學定義：生物學是研究生命現象和生物活動規律的科學。
據研究對象分為動物學、植物學、微生物學、古生物學等；依研究內容，分為分類學、解剖學、生理學、細胞學、分子生物學、遺傳學、進化生物學、生態學等；從方法論分為實驗生物學與系統生物學等體系。

㈦ 分子生物學實驗技術都有哪些

PCR
分子克隆
核酸電泳、瓊脂糖凝膠電泳
測序
DNA,RNA 提取
轉化外源DNA
體外轉錄、逆轉錄
cDNA文庫構建
原位雜交、酵母雙雜交、差減雜交、扣除雜交
藍白斑篩選、抗生素篩選
基因工程技術大部分都是依據分子生物學原理設計出來的.

㈧ 分子生物學技術的分類

目前，常用的分子生物學技術有如下幾種 ： PCR- 單鏈構象多態性分析(PCR- single strand conformation analysis,PCR- SSCP) 是近年來在基因突變檢測中運用最廣泛的方法之一。PCR- SSCP 技術憑借突變可引起單鏈DNA三級構象改變,通過觀察單鏈DNA在非變性聚丙烯醯胺凝膠中的遷移率漂移來判斷突變。樣品經PCR 擴增後，其產物經變性後可以產生2 條單鏈，如果存在基因突變，哪怕是一個鹼基的異常，單鏈的構象也會發生變化，正常與突變的DNA單鏈在聚丙烯醯胺凝膠電泳(PAGE) 中，可以顯現出不同的帶型，從而確定野生型和突變型，PCR- SSCP 分析的主要優點是簡易且敏感性較高。但是該技術不能確定突變的部位和性質。PCR- SSCP 突變檢測敏感性隨PCR 產物長度的增加而降低，一般用於檢測較小外顯子的突變。有時由於單個核苷酸變化所引起的構象改變很小，用PAGE 電泳就可能無法檢出，在PCR 產物或待測DNA 小於200 bp 時，PCR- SSCP 分析能夠檢測出70%~ 95%的突變。如果以毛細管電泳代替PAGE，則可大為提高突變檢測的效率。
Wallace1997 年提出將PCR- SSCP 和異源DNA雙鏈分析（heteroplex analysis,HA) 相結合，稱之為SSCP/ HA，部分PCR 產物經變性進行SSCP 分析以了解是否具有突變，其餘PCR 產物直接用於電泳，以檢出含有突變的異源DNA雙鏈，電泳凝膠經銀染，單鏈DNA所形成的帶為橘黃或棕色，而雙鏈DNA則表現為灰黑色。該綜合手段可以單鏈構型多態性和異源雙鏈構型分析兩個不同的層次檢出突變，是一種經濟、迅速的突變檢測手段，但無法提供突變位置的信息。
PCR- SSCP 有許多改進技術，如RNA單鏈構象多態性法（PCR- rSSCP）、雙脫氧測序單鏈片段構象多態分析（PCR- ddF）、限制酶指紋技術(PCR- REF) 等。PCR- rSSCP 法依據RNA構象對單個鹼基替代更敏感的原理，在PCR 引物上加上某類啟動子，通過轉錄的RNA構象體的電泳遷移差異進行突變鑒別。PCR- ddF 法把PCR 產物轉錄，將轉錄物用反轉錄酶進行Sanger 雙脫氧終止測序反應，通過觀察非變性膠上經解鏈處理所產生的單鏈漂移、突變後終止片段的獲得與缺失來判斷突變。PCR- REF 法將RFLP 和SSCP 技術優勢組合，將PCR 擴增的待測片段用5~ 6 種限制酶依次消化，混合並進行末端標記，最後經變性處理並在非變性凝膠上電泳分離，從而獲得來自片段長度和片段構象的雙重突變信息。 變性梯度凝膠電泳(denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE) 利用由鹼基序列所決定的DNA片段溶解度或變性度的差異，達到分離野生型與突變型DNA片段的目的，該手段解析度達一個鹼基。當DNA 雙鏈沿變性劑濃度梯度增加的聚丙烯醯胺凝膠遷移時，DNA分子中解鏈溫度（Tm) 低的部分逐漸變性解鏈。一般總是錯配鹼基部分的異源雙鏈Tm最低，最容易解鏈，其次是富含AT 鹼基對的部位，富含GC鹼基對的部位Tm值較高所以解鏈較難。因此，正常DNA雙鏈和異源雙鏈在梯度變性膠中電泳時，異源雙鏈總是先解鏈。將PCR 產生的雙鏈DNA在濃度遞增的尿素和甲醯胺變性聚丙烯醯胺凝膠上電泳，當某一DNA片段遷移到變性劑濃度與其最低Tm相當的位置時，該片段低溫解鏈部分的雙鏈打開，部分解鏈導致DNA遷移速度明顯下降，觀察樣品的遷移率變化即可判斷是否存在變異。DGGE 敏感性高，即便異源雙鏈中僅含一個錯配鹼基，在電泳時也可分辨其遷移率的改變。DGGE 方法的單鹼基突變檢出率在DNA片段長度600 bp 以內可以達到95%。
DGGE 的成功有賴於雙鏈DNA內部低溫解鏈部分變性後遷移率的改變。但在相當於最高Tm的變性劑濃度的位置，相應的DNA片段可能全部解鏈，使試驗無法檢出存在於高Tm DNA片段中的鹼基替換。為了解決此問題，可以在一個PCR 引物的5 ' 端設計一段富含GC的尾巴，從而使PCR 擴增產物的一端富含GC 鹼基對，保證了絕大多數DNA片段不會發生完全解鏈，在最高變性劑濃度區域仍然可以分辨出部分解鏈的異源雙鏈，這一改進使DGGE 的突變檢出率接近100%，但DGGE 只能檢測突變是否存在而不能確定突變的位置。
DGGE 方法需要設計特定片段最佳的PCR引物以及最佳變性條件，這一過程比較復雜，梯度變性膠的制備需要的設備較昂貴，所以在常規實驗室不易實施。 等位基因特異性擴增法（allele- specific amplificarion,ASA) 是基於PCR技術的一種單核苷酸突變檢測法，是分析已知鹼基替代或微小片段缺失和插入型突變的常規技術。在PCR 的引物設計中，根據已知突變位點性質在引物3 ' 端或中間設計一錯配鹼基，使之僅能與突變型或野生型基因互補而只擴增突變型或野生型基因。
ASA技術只需一步PCR反應，甚至無需電泳和標記技術。因其快速，重復性強，耗資少，無同位素污染以及高效性等特點，將成為有前途的適應於人群大規模突變篩查的方法。應用該方法最好避免錯配鹼基為G: T，這種錯配可能引發擴增反應。 化學裂解錯配鹼基法（chemical cleavage mismatch,CCM) 通過化學修飾並切割異源DNA雙鏈中錯配鹼基，達到檢測點突變的目的。其原理是末端標記的DNA片段暴露於可以識別並修飾異源雙鏈中錯配鹼基的化學試劑中（如錯配的胞嘧啶可被羥胺修飾，錯配的胸腺嘧啶可被四氧化鋨修飾），被修飾的位點隨即可被雜氮環已烷等化學物質裂解。DNA修飾裂解後，電泳觀察DNA片段長度即可知道突變是否存在。該技術較其他突變檢測系統有更多的優越性，可以掃描1~ 2 kb 的大片段DNA並在隨後的順序分析中定位突變位點，其效率可達100%。該手段通常首先對目標DNA和野生型DNA進行PCR 擴增，然後對野生型DNA擴增片段進行末端標記，標記片段作為探針與目標序列復性形成異源雙鏈，用四氧化鋨（OsO4） 或羥胺（hydroxylamine) 修飾並用哌啶（piperidine) 切割，聚丙烯醯胺電泳分離不同長度的片段。近年來，有人採用碳化二亞胺作為錯配修飾劑，進一步提高了該方法的敏感性。CCM方法最初採用同位素DNA片段，用熒游標記代替同位素後，稱之為熒光化學裂解錯配鹼基法（FCCM），該方法依然比較敏感並且安全，可檢出95%~ 100%的錯配。化學裂解錯配鹼基法的不足之處在於工作量大，需要使用有害化學物質作為試驗用試劑。

㈨ 免疫分子生物學技術有哪些

免疫化學實驗包括免疫血清的制備、沉澱反應定量法、對流免疫電泳、單向定量免疫電泳（火箭電泳）、雙向定量免疫電泳（交叉免疫電泳）、微量免疫電泳以及單向雙向免疫擴散、酶聯免疫吸附測定等。
免疫電泳法（immunoelectrophoresis）在凝膠介質中將電泳法與擴散法相結合的一種免疫化學方法，用以研究抗原和抗體。酶免疫測定（enzyme immunoassay, EIA）或免疫酶技術（immunoenzymatic technique）是指用酶標記抗體或酶標記抗體進行的抗原抗體反應。它採用抗原與抗體的特異反應與酶連接，然後通過酶與底物產生顏色反應，用於定量測定。目前常用的方法稱為酶聯免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）。酶免疫測定技術還包括生物素―親和素系統（biotin-avidin system, BAS），均相酶免疫測定法（homogeneous enzyme immunoassay, HEI）等。
免疫標記技術中還有免疫熒光技術（immunofluorescence technique），放射免疫測定（radioimmunoassay, RIA）和發光免疫測定（luminescent immunoassay, LIA）等。
免疫印跡或免疫轉印技術（immunoblotting或Western blot）已廣泛應用於分子生物學和醫學領域，成為免疫學、微生物學及其它生命科學常用的一種重要研究方法。
流式細胞術、免疫組化、蛋白質晶元、免疫共沉澱等，在分子生物學方面的應用也越來越廣泛。