❶ 什麼叫電泳,電泳主要用來做什麼
帶電顆粒在電場作用下,向著與其電性相反的電極移動,稱為電泳(electrophoresis, EP)。利用帶電粒子在電場中移動速度不同而達到分離的技術稱為電泳技術。
1807年,由俄國莫斯科大學的斐迪南·弗雷德里克·羅伊斯(Ferdinand Frederic Reuss)最早發現。
1936年瑞典學者A.W.K.蒂塞褲納配利烏斯設計製造了移動界面電泳儀 ,分離了馬血清白蛋白的3種球蛋白,創建了電泳技術。
電泳應用:
1、聚丙烯醯胺凝膠電泳可用做蛋白質純度的鑒定。
聚丙烯醯胺凝膠電泳同時具有電荷效應和分子篩效應,可以將分子大小相同而帶不同數量電荷的物質分離開,並且還可以將帶相同數量電荷而分子大小不同的物質分離開。
其解析度遠遠高於一般層析方法和電泳方法,可以檢出10-9~10-12g的樣品,且重復性好,沒有電滲作用.
2、SDS聚丙烯醯胺凝膠電泳可測定蛋白質分子量。
3、聚丙烯醯胺凝膠電泳可用於蛋白質定量。
電泳後的凝膠經凝膠掃描儀掃描,從而給出定量的結果.凝膠掃描儀主要用於對樣品單向電泳後的區帶和雙向電泳後的斑點進行掃描。
4、電泳可用於檢查蛋白質制劑的純度,分析蛋白質混合物的組分。
電泳基本原理:
生物大分子如蛋白質,核酸,多糖等大多都有陽離子和陰離子基團,稱為兩性離子。常以顆粒分散在溶液中,它們的靜電荷取決於介質的H+濃度或與其他大分子的相互作用。
在電場中,帶電顆粒向陰極或陽極遷移,遷移的方向取決於它們帶電的符號,這種遷移現象即所謂電泳。
如果把生物大分子的膠體溶液放在一個沒有干擾的電場中,使顆粒具有恆定遷移速率的驅動力來自於顆粒上的有效電荷Q和電位梯度E。它們與介質的摩擦阻力f抗衡。在自由溶液中這種抗衡服從Stokes定律。
這里v是在介質粘度為η中半徑為r的顆粒的移動速度。但在凝膠中,這種抗衡並不完全符合Stokes定律。F取決於介質中的其他因子,如凝膠厚度,顆粒大小,甚至介質的內滲等。
電泳茄蔽遷移率(mbility)m規定為在電位梯度E的影響下,顆粒在時間t中的遷移胡指距離d。
遷移率的不同提供了從混合物中分離物質的基礎,遷移距離正比於遷移率。