Ⅰ 超薄切片技術操作過程是什麼
觀察病毒在細胞組織內的狀態,可採取超薄切片技術,將標本用固定液固定後,經過脫水滲透包埋聚合切片等過程,切成薄片然後染色檢鏡。
(1)固定。
常用的固定液主要有鋨酸固定液、醛固定液、高錳酸鹽固定液等。
①鋨酸固定液:這是最常用的固定液,作用迅速,新鮮的鋨酸呈淺黃色,其蒸氣極毒,使用時應在強通風櫃中把裝有鋨酸的安瓿瓶在緩沖液內敲碎。
②醛固定液:植物材料具有厚壁,鋨酸固定液不能很好滲透,有時固定得不好。而醛固定液往往可獲得較好效果,同時還不會破壞酶的活性,可以在切片上進行組織化學測定。常用的有甲醛固定液和戊二醛固定液。
③高錳酸鹽固定液:此種固定液可保持膜的結構,但破壞核糖體並失去酶的活性,對維持TMV粒子在細胞內的排列比戊二醛及鋨酸固定液好。
緩沖液可用1%液體鋨酸和1%過錳酸鉀,也可用磷酸鹽巴比妥-醋酸和二甲胂酸鹽緩沖液。固定可在0~5℃或室溫下進行,供試材料盡可能使用幼嫩的植株,小的根可整個固定,葉片需剪成1~2cm的小塊。葉中的空氣會阻止固定液與大部分細胞接觸,可在真空下把空氣除去。
組織固定後必須徹底沖洗,在進行鋨酸固定前要把多餘的醛用緩沖液沖洗徹底。固定後的組織一定要進行脫水,特別是採取不溶於水的樹脂包埋時,在室溫低於4℃時,丙酮或乙醇脫水效果都很好。
(2)包埋。
包埋用的樹脂可分為四類,即甲基丙烯酸酯、環氧樹脂、聚酯樹脂和各種水溶性化合物。
甲基丙烯酸酯在聚合過程中可能引起組織損傷,在電子束轟擊下,這種介質有升華的趨向,引起細微組織結構的破壞。但甲基丙烯酸酯也有優點,它比環氧樹脂能切出較大的切塊切面,切片也容易染色。
環氧樹脂和聚酯樹脂是保存細胞細微結構的最好包埋材料,目前最常用的環氧樹脂是Epon和Araldite,用它包埋的標本可避免聚合損傷,樹脂切片在電鏡下不升華,可使標本連續觀察,並保存細微結構。
水溶性樹脂劑對一些不希望用有機溶劑脫水,或利用組織切片做酶外處理試驗特別有用,其缺點是不能很好地保持細胞的細微結構。
組織需在包埋介質中充分滲透,常用的有兩種方法:
①環氧樹脂包埋組織的滲透。將丙醇脫水的組織轉到裝有6ml由等量丙酮和環氧樹脂的標本管中,將標本管放在烤箱內由傾斜45°角的馬達帶動的輪上,使其不斷轉動,丙酮由開口的管中蒸發,當丙酮味消失後,將組織在擦鏡紙上吸干,浸入新鮮的樹脂中,再於同一溫度下放4h,再一次吸干組織後,移到裝有新鮮樹脂的膠囊內,將Epon塊放在40℃下,直至完全變硬,並繼續在60℃下凝固12h。
②水溶性樹脂包埋組織的滲透。將組織在戊二醛中固定,在緩沖劑中沖洗1~12h,然後在80%GMA單體和20%的水中脫水20min,再於97%GMA單體和3%的水中繼續脫水20min後,在制備的聚合混合物中滲透過夜。將組織放在烘爐內的明膠膠囊中,注滿聚合混合物除去所有空氣泡,蓋好使其不使與空氣接觸,把膠囊用金屬絲垂直吊起,用長波長的紫外光聚合1~3d即可。
(3)切片。
切片前切去埋塊四周的樹脂,留下高2~3mm的標本正方柱,裝入切片機,使埋塊面的平行邊與刀口平行,把刀慢慢向標本推進,通過切片機上的目鏡系統,把刀推到看不到有間隙之處,每次推進0.5~1.0μm,直到切下切片。切片厚度以能達到浮於液面的切片呈灰色為最好。切片可用醋酸雙氧鈾和檸檬酸鉛進行染色。染色後的切片在0.1N氫氧化鈉中沖洗,然後用水沖洗。
Ⅱ 簡述PCR技術操作步驟
PCR即聚合酶鏈式反應(Polymerase chain reaction)的縮寫,它是體外酶促合成特異DNA片段的方法。這一方法的要點是合成兩個分別互補於待擴增DNA片段兩端的小片段引物,在含有引物、待擴增DNA模板核苷酸底物和DNA多聚酶的反應體系中DNA復制反復進行,在短時間內可以取得大量擴增產物。其原理是寡聚核苷酸鏈引物在DNA聚合酶的作用下沿模板延伸,合成兩個與靶DNA兩側序列互補的引物,在體外進行靶DNA的重復合成。
主要的技術步驟是:
(1)DNA變性 加熱使靶DNA序列雙鏈解離成單鏈DNA。
(2)引物與靶DNA退火 適當降低溫度,使兩個引物分別結合成靶DNA兩條的3′末端向5′末端延伸。
(3)引物延伸 在DNA聚合酶的催化下,引物沿著靶DNA3′末端向5′末端延伸。新合成的DNA鏈在變性解離後,又可作為模板與引物雜交,並且在DNA聚合酶的催化下,引導合成新的靶DNA鏈。如此反復進行以上3個步驟,即可使靶DNA片段指數性擴增。
Ⅲ 50項護理操作技術有哪些
1、手衛生技術(一般洗手法)。
2、無菌技術。
3、生命體征監測技術。
4、口腔護理技術春漏談。
5、鼻飼護理技術。
6、留置導尿管技術。
7、胃腸減壓技術。
8、大量不保留灌腸技術。
9、氧氣吸入(氧氣筒供氧)技術搜慶。
10、氧氣吸入(中心供氧)技術。
11、換葯技術。
12、氧氣驅動霧化吸入技術。
13、快速血糖監測技術。
14、口服給葯技術。
15、密閉式周圍靜脈輸液技術。
16、密閉式周圍靜脈輸血技術。
17、BDY型密閉式防針刺傷型安全留置針。
18、靜脈注射技術。
19、PICC技術。
20、動脈采血技術。
21、肌內注射技術。
22、皮內注射法(青黴素過敏試驗)技術。
23、皮下注射技術。
24、物理降溫技術。
25、單人心肺復甦技術。
26、經鼻或口腔吸痰技術操作評分標准。
27、經氣管插管/氣管切開患者吸痰技術。
28、心電監護儀的使用技術。
29、人工呼吸機應用技術。
30、微量注射泵使用技術。
30、非同步心臟電除顫術。
31、軸線翻身技術。
32、患者搬運法(協助患者移向床頭)。
33、患者約束技術。
34、痰標本採集技術。
35、咽拭子培養標本採集技術。
36、電動洗胃技術。
37、「T」管引流技術。
38、造口護理技術。
39、膀胱沖洗技術。
40、腦室管引流技術。
41、胸腔閉式引流技術。
42、會陰消毒技術。
43、新生兒暖箱應用技術。
44、光照療法。
45、新生兒臍部護理技術。
46、聽胎心音技術。
47、患者入院護理。
48、患者出院護理。
49、預防患者跌倒。
50、壓瘡的預防及護理技術。
(3)什麼的操作技術擴展閱讀:
職業要求
護理專業中專以上學歷,取得護士執業資格。
護士被稱作天使的職業,它需要有愛心、細心、責任扒碰心以及耐心,一名優秀的護士不僅需要了解診療護理常規,熟練掌握護理三級操作技能;而且要有很強的親和力、溝通能力以及語言表達能力。具有高度的責任心、良好的職業道德、嚴謹的工作態度、較強的綜合分析能力,敏銳的洞察力。
按照《護士條例》規定,凡符合以下條件之一,並在教學、綜合醫院完成8個月以上護理臨床實習的畢業生(包括應屆畢業生),可報名參加護士執業資格考試,獲得省級以上教育和衛生主管部門認可的普通全日制中等學校護理、助產專業學歷,擔任護士職務滿5年。
獲得省級以上教育和衛生主管部門認可的普通全日制高等學校護理、助產專科學歷,從事本專業工作滿3年;獲得國務院教育主管部門認可的普通全日制高等學校護理、助產專業本科以上學歷,從事本專業工作滿1年。
考生的報名資格由省級衛生行政部門負責審核,考試合格者由衛生部人才交流服務中心發給考試成績合格證明,作為申請護士執業注冊的有效證明。