A. RNA的提取方法步驟及原理.
RNA抽取一般使用Trizol法抽提:
Trizol是一種總RNA抽提試劑,內含異硫氰酸胍等物質,能迅速裂解細胞,抑制細胞釋放出的核酸酶活性。目前常用Trizol法進行提取組織或細胞中的RNA。
Trizol作用原理:
在勻質化或溶解樣品中,Trizol試劑可保持RNA的完整性,同時能破壞細胞及溶解細胞成分。加入氯仿離心後,裂解液分層成水相和有機相。RNA存在於水相中。
水相轉移後,RNA通過異丙醇沉澱回收。移去水相後,用乙醇可從中間相沉澱得到DNA,加入異丙醇沉澱可從有機相得到蛋白質。
與DNA不同,RNA一般為單鏈長分子,不形成雙螺旋結構,但是很多RNA也需要通過鹼基配對原則形成一定的二級結構乃至三級結構來行使生物學功能。
RNA的鹼基配對規則基本和DNA相同,不過除了A-U、G-C配對外,G-U也可以配對。
在細胞中,根據結構功能的不同,RNA主要分三類,即tRNA(轉運RNA),rRNA(核糖體RNA),mRNA(信使RNA)。mRNA是合成蛋白質的模板,內容按照細胞核中的DNA所轉錄;tRNA是mRNA上鹼基序列(即遺傳密碼子)的識別者和氨基酸的轉運者;rRNA是組成核糖體的組分,是蛋白質合成的工作場所。
B. 常用於研究基因表達的分子生物學技術
首先,基因表達是基因轉錄和翻譯的過程,大多數基因表達都經歷「轉錄→翻譯→蛋白質」的過程,因此研究基因表達就是檢測mRNA和蛋白質。DNA印跡,是通過雜交檢測DNA的缺失、插入的方法;RNA印跡和反轉錄PCR分別通過雜交、逆轉錄和PCR檢測mRNA的方法;Weasten印跡,是通過雜交蛋白質的方法。
所以常用的基因表達分子生物學技術有:RNA印跡和反轉錄PCR,Weasten印跡。
C. rna-seq技術是什麼
RNA-seq即轉錄組測序技術,就是用高通量測序技術進行測序分析,反映出mRNA,smallRNA,noncodingRNA等或者其中一些的表達水平。