㈠ 幾種新的pcr技術分別是哪些和介紹
熱啟動PCR
熱啟動PCR是除了好的引物設計之外，提高PCR特異性最重要的方法之一。盡管Taq DNA聚合酶的最佳延伸溫度在72℃，聚合酶在室溫仍然有活性。因此，在進行PCR反應配製過程中，以及在熱循環剛開始，保溫溫度低於退火溫度時會產生非特異性的產物。這些非特異性產物一旦形成，就會被有效擴增。在用於引物設計的位點因為遺傳元件的定位而受限時，如site-directed突變、表達克隆或用於DNA工程的遺傳元件的構建和操作，熱啟動PCR尤為有效。
限制Taq DNA聚合酶活性的常用方法是在冰上配製PCR反應液，並將其置於預熱的PCR儀。這種方法簡單便宜，但並不能完成抑制酶的活性，因此並不能完全消除非特異性產物的擴增。
熱啟動通過抑制一種基本成分延遲DNA合成，直到PCR儀達到變性溫度。包括延緩加入Taq DNA聚合酶在內的大部分手工熱啟動方法十分煩瑣，尤其是對高通量應用。其他的熱啟動方法使用蠟防護層將一種基本成分，如鎂離子或酶，包裹起來，或者將反應成分，如模板和緩沖液，物理地隔離開。在熱循環時，因蠟熔化而把各種成分釋放出來並混合在一起。象手動熱啟動方法一樣，蠟防護層法比較煩瑣，易於污染，不適用於於高通量應用。
Platinum DNA聚合酶對於自動熱啟動PCR來說方便高效。Platinum Taq DNA聚合酶的成分為復合有抗Taq DNA聚合酶單克隆抗體的重組Taq DNA聚合酶。此酶在常溫下活性被封閉，要在94℃－ 95℃下加熱數分鍾才能夠恢復酶活性。同經化學修飾用於熱啟動的Taq DNA聚合酶相比，Platinum酶不需要在94℃延時保溫（10到15分鍾）以激活聚合酶。使用PlatinumTaq DNA聚合酶，在94℃進行2分鍾就可以恢復90％的Taq DNA聚合酶活性。
Touch-down PCR
Touch-down PCR又稱降落PCR.即選定一個溫度范圍，如50—35 ℃ ，每降1-2 ℃進行1-2個循環，然後在50度下進行15個循環。
RT-PCR
RNA的多聚酶反應（RT-PCR）是以RNA 為模板，聯合逆轉錄反應（reverse transcription，RT）與PCR，可用於檢測單個細胞或少數細胞中少於10個拷貝的RNA模板。
㈡ pcr技術分類
RT-PCR 原理：首先提起RNA，然後用逆轉錄酶與MRNA為模板進行CDNA第一鏈的合成。2、免疫PCR(immuno polymerase chain reaction , IPCR IPCR原理：是用一段已知DNA 分子標記抗體作為探針,用此探針與待測抗原反應,PCR 擴增粘附在抗原抗體復合物上的這段DNA 分子,電泳定性,根據特異性PCR 產物的有無,來判斷待測抗原是否存在。3、巢式PCR 巢式PCR原理：是用內外兩對引物擴增拷貝數較低的片段.先用外引物進行第一輪反應,將產物適當的稀釋,然後用內引物繼續擴增。4、實時熒光PCR：利用熒光來檢測PCR產物，PCR每循環一次就收集一個數據，通過實時擴增曲線，准確確定CT值，從而確定其實DNA拷貝數。5、原位PCR就是在組織細胞里進行PCR反應，它結合了具有細胞定位能力的原位雜交和高度特異敏感的PCR技術的優點，是細胞學科研與臨床診斷領域里的一項有較大潛力的新技術.