❶ 雙分子熒光互補的BiFC技術緣起
目前,BiFC系統不僅可以直觀地檢測到1對蛋白質在體內或體外的相互作用,也可以由不同顏色的BiFC系統在同1個細胞中共用實現多組蛋白質相互作用的同時檢測。2008年,Shyu等又將BiFC技術和FRET技術結合起來,建立了基於雙分子熒光互補的熒光共振能量轉移技術(BiFC-FRET),BiFC2FRET採用了青色的熒光蛋白cerulean和1個黃色的基於venus的BiFC系統聯用,能同時檢測3個蛋白之間的相互作用。其做法是,將bJun和bFos分別和venus熒光蛋白的N,C端片段相連,bJun和bFos的相互作用使得venus蛋白重建;當和cerulean融合的蛋白NFAT1和bJun和bFos異源二聚體相互作用時,cerulean可以作為供體將能量共振轉移至重建後的venus熒光蛋白,實現3個蛋白質相互作用的共檢測。