什麼叫做微生物保藏技術

『壹』 Help ! 微生物學中菌種的保存原理是什麼

看情況了
一般而言微生物菌種的保藏就是盡量使得微生物的代謝緩慢進行，防虧廳止出現性能或者機體能力的退變銷源隱，要達到這個目的，我們可以根據不同微生物的種類進行設計。產芽孢的菌使用芽孢進行保藏，因為芽孢具有極佳的抗逆性。不產芽孢的菌種我們選擇處於對數生長期的菌種進行傳代保藏（因為處於對數期的菌種比較容易接受新環境，與所必須的生長因子等有關）。
額外說一句，我個人認為：無論是什麼樣的保藏方法，我們都不能絕對保證菌種的特性和保藏前一模一樣，保藏時間越長越容易出問題。裂吵

『貳』 常用的菌種保存方法有哪些

菌種保藏是食用菌產業的一項基礎工作，是確保野生種質資源基因留存和現有生產用種遺傳性能相對穩定的必要手段。菌種保藏的方法多種多樣，有的雖然保藏效果好，但投資高或操作繁雜。在生產實踐中，更需要設備投入少，能保障菌種不死亡、不污染、最大限度地保持優良種性的簡便方法，如斜面低溫短期保藏和自然基質較長期保藏相結合的方法。

一般而言，對母種進行長期保升毀存，對原種進此宴行短期保存。須保證優良菌種的性狀和活力不發生變異，不死亡，不被污染，確保其純度。因此，保存方法應具備取材容易、操作方便、菌種不易退化、長期保存不污染雜菌等優點。常用的菌種保存方法如下：

（一）斜面低溫保藏 該法的優點是保藏方便且所佔空間較小。具體做法是：菌絲長滿斜面後，放在0～5℃保存。以後每隔一定時間（2～3個月）轉管一次。轉管保存不能長期用PDA培養基，否則種性易退化，灰樹花降解木質纖維素的能力減弱。因此隔一定時間（1年左右）須把菌種轉接到木屑培養基上復壯，之後挑選健壯無污染的菌絲再轉回PDA培養基保存。在長期保存過程中，要防棉塞受潮滋生雜菌。菌種試管口最好用蠟燙封，以防培養基內水分過快蒸發。增加瓊脂用量（2.5%～3%）可減緩水分蒸發。還要防止菌種管上的標簽脫落而造成種系混雜。

斜面低溫保藏方法簡便易行，能隨時觀察保藏菌株的活力和純度，一旦染雜，肉眼能及時發現。

（二）自然基質保藏 此法是根據灰樹花的特性，利用自然基質保藏其菌種的方法。灰樹花是木腐菌，可以採用以木屑為主料的培養基。自然基質營養全面，且大部為緩釋養分，不易產生營養過剩或飢餓；其次，培養基理化性狀好，可吸收或緩沖菌絲代謝出的有害物質，水分與通氣協調平衡，部分菌絲扎入基質內生長，不裸露於空氣中，菌絲呼吸強度低，生命力強。

1.原料與配方 粗、細木屑比例適當，採用板栗樹木屑最佳，粗木屑粒徑為2毫米左右，細木屑為一般圓盤鋸屑，粗、細的比例為1∶2，添加吵扒備干木屑重量20%的麩皮和1%的糖，含水率為60%左右。這樣的基質通氣性好，營養豐富且供菌絲分解利用的時間長，長到基質內部的菌絲比包裹在基質外部暴露於空氣中的菌絲耐受性強。不同粒徑的基質比例適當，還能協調氣與水的矛盾。粗粒過多，架空菌絲多；細粒過多，透氣性差，菌絲生長慢。應用配方如下：

栗木屑78%，麩皮20%，石膏1%，蔗糖1%，水65%配料，裝入較粗大的試管中，裝料量為試管的1/3～1/2，1.5千克/厘米2滅菌1.5小時。冷卻後，接入需保藏的菌種，在28℃下培養，待菌絲長滿木屑培養基時取出換上無菌橡皮塞，在0～5℃冰箱內保藏1～2年轉管一次。

2.容器與裝量 採用容量250毫升的葡萄糖玻璃瓶，清洗潔凈，裝量一般不超過玻璃瓶容量的3/5，填料不能過滿，瓶壁所殘留的顆粒須擦拭乾凈，否則保藏的菌種易引起污染。

3.滅菌和冷藏 滅菌時若採用棉塞封口，基質表層易失水，接種成活率低，即使菌絲復活，生長也很緩慢，所以最好採用聚丙烯膜封口，接種後換用無菌棉塞培養，待菌絲長滿後再換成有孔滅菌膠塞冰箱保藏。

用上述方法保藏的菌種經3年貯放後，接出成活率均達90%以上，出菇驗證產量及子實體形態特徵均無明顯變化。因此，自然基質保藏法具有保存期長，菌種遺傳性能相對穩定的特點。

（三）木粒PDA斜面保藏 灰樹花在自然狀態下易發生於栗樹根部，這說明其營養需求較為特殊。根據灰樹花這種習性，在PDA基礎上添加適量的栗樹木粒製成母種培養基。在多年的使用中發現，用該培養基培養的母種生長勢好，在轉接原種時，適應能力強，萌發定植快；用作菌種保藏基質時，保藏時間長，並能很好保持菌種的優良性狀。

1.木粒PDA的製作 選取栗樹邊材，加工成0.3～0.5厘米的顆粒，及時烘乾或曬干備用。稱取葡萄糖10克，KH2PO41克，1溶解於1升清水中配製成營養液。將營養液倒入盛有木粒的小鋁鍋中，營養液以完全浸沒木粒為准。煮沸10分鍾，以加快木粒對營養液的吸收速度，起鍋靜置30分鍾讓木粒吸足營養液。撈出木粒，瀝掉表面的水，裝入試管，裝量為試管長的1/6，最多不得超過試管長的1/5，否則在擺制斜面時，不易使木粒均勻分散於斜面的表面上。

選取新鮮的馬鈴薯，去皮並切成薄片，稱取200克放入小鋁鍋中，加入1升清水，文火煮沸30分，趁熱過濾取汁，並補足1升的體積。稱取瓊脂20克，葡萄糖20克，KH2PO4 2克，MgSO47H2O 2克。先將瓊脂剪碎，加入到馬鈴薯濾液中，繼續用文火加熱，使瓊脂溶化。待瓊脂完全溶化後，加入稱好的其他3種營養成分，攪拌使這些物質溶解均勻，趁熱裝入已裝有木粒的試管中，裝至試管長的1/3處，塞上棉塞。

在0.8～1千克/厘米2蒸氣壓下滅菌40分，待氣壓降至0時，開蓋取出，趁熱輕輕抖拍試管，使木粒分散後即可擺制斜面，並使木粒呈半裸狀分布於斜面上，待凝固後便製成了木粒PDA培養基。

2.生長及保藏效果 木粒PDA斜面上培養的灰樹花母種，菌絲生長迅速、良好，12天即可長滿試管，但菌絲的後期生長勢更為粗壯、濃密，後勁足。轉接原種時，菌種適應力強，定植快。這表明，灰樹花菌絲的生長速度、生長勢不僅取決於本身的遺傳性，而且很大程度上取決於培養基的營養。常規PDA的營養成分，主要是可溶性的速效性營養，前期營養豐富，營養利用直接，因而前期菌絲生長迅速、良好，後期營養則不足，菌絲生長不良，長勢欠佳。木粒PDA由於在增添了木粒這一緩效性營養，就木腐性的灰樹花而言，營養配伍合理，補充了菌絲生長後期所需的營養，因此後勁足。

菌絲體對基質的分解利用是通過菌絲細胞分泌的胞外酶，將基質中的大分子營養分解成小分子營養後才被吸收利用的，而這些胞外酶大多為誘導酶，其合成與分泌受基質的誘導和分解產物阻遏機制調節。就纖維素酶而論，許多易代謝碳源（如葡萄糖等）具有引起酶合成阻遏作用，同時伴隨著菌絲體的旺盛生長，酶的大量合成則出現在易代謝碳源基本耗盡之後，且受到基質纖維素的誘導，常規PDA基質，到葡萄糖等易代謝碳源基本耗盡的後期，由於營養的缺乏，菌絲生理機能下降，酶的合成量減少。而木粒PDA不僅含有易代謝碳源——葡萄糖，又含有木粒這一緩效性營養，前期葡萄糖促進了菌絲體旺盛生長，獲取了大量的菌絲體，表現為菌絲粗壯、濃密。到了易代謝碳源耗盡的後期，木粒一方面補充了後期所需的營養，使菌絲的生埋機能維持在一定的水平；另一方面木粒的纖維素激活菌絲細胞纖維素酶的誘導機制，合成了大量的酶，保持了木腐生性灰樹花較強的分解木材的能力，因此，用該培養基培養的母種在轉接原種時適應力強，萌發定植快。因部分菌絲長入木粒內部，抵抗不良環境的生存能力增強，種質不易退化。木粒PDA灰樹花菌種，在0～5℃保藏2～3年再轉管活化，成活率仍達到90%左右。此外，木粒PDA應用於木腐性灰樹花種的提純復壯，效果也較理想。

（四）石蠟隔氧封藏 具體做法是將液態石蠟分裝入三角瓶內，裝量達瓶空間的1/3，塞好棉塞，於121℃滅菌2小時，然後置40℃溫箱中，使其水分蒸發，或置於乾燥器內數日以除去水分，石蠟呈透明狀為宜。在無菌條件下，用無菌吸管裝入已長好菌絲的斜面試管，使液面高出斜面頂部1厘米左右。塞上無菌橡皮塞，豎直保存。此法可使菌種存活3年以上，但以1～2年移植一次為好。移植時不必倒出石蠟，用接種鉤取一塊菌絲即可。因轉移時帶有石蠟，菌絲生長弱，需要再轉管1～2次，方能復壯。

『叄』 保藏菌種的方法有哪些

1、傳代培養保藏法：包括賣凳又有斜面培養、穿刺培養、皰肉培養基培養等，培養後於4-6℃冰箱內保存。

2、液體石蠟覆蓋保藏法：液體石蠟覆蓋保藏法是傳代培養的變相方法，能夠適當延長保藏時間。

3、載體保藏法：載體保藏法是將微生物吸附在適當的載體，如土壤、沙子、硅膠、濾紙上，而後進行乾燥的保藏法。

4、寄主保藏法：寄主保藏法用於目前尚不能在人工培養基上生長的微生物。

5、冷凍乾燥保藏法：先使微生物在極低溫度（-70℃左右）下快速冷凍，然後在減壓下利用升華現象除去水分（真空乾燥），其中真空冷凍乾燥法最中正旅常見。

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菌種保藏的原理：

菌種保藏有多種方法，其原理大多大同小異，主要是運用一些方式盡量降低生物體內的代謝，達到延長生命，減少變異的目的。通常採用的方法為低溫、缺氧、乾燥。

低溫主要對菌種產生兩方面的影響，首先，較低的溫度可以減緩機體細胞的酶活，降低新陳代謝，達到保藏菌種的目的。其次，低溫同時會導致菌體誘發菌絲自溶機制，如果降溫過程失誤，同樣會造成機體的清凳機械損傷和溶質損傷。

『肆』 微生物菌種保藏的方法有哪些

菌種的優劣是食用菌生產成敗的關鍵。菌種是國家重要的生物資源，也是微生物工廠首要的生產資料。由於微生物繁殖快、易變異，因此微生物菌種特別需要妥善保藏。世界各國對微生物菌種都很重視。中國科學院微生物研究所專門設立了菌種的保藏機構，為各生產單位收藏和供應各種優良菌種。當然就具體的生產單位而言，大量的生產用菌種還得靠自己來生產和保藏。
菌種保藏的目的：是使優良菌種經過較長時間後，仍能保持菌種的優良性狀、生活能力及純度，降低菌種的衰亡速度，確保菌種的純一，防止雜菌污染及絕種。
保藏菌種的方法：人們在長期的生產實踐中，積累了不少保藏菌種的經驗，常用的保藏方法有：斜面低溫保藏法、液體石蠟保藏法、砂土管保藏法、濾紙片保藏法、穀粒保纖含畢藏法等。常用保藏菌種的方法有以下幾種：
（1）斜面低溫保藏法這是最簡單最普通的保藏方法。首先將菌種在適宜的斜面培養基（一般PDA）上培養成熟後，選擇菌絲生長粗壯，邊緣保存。一般保存溫度4～6℃，除草菇和銀耳菌種外（10～15℃），此方法對其他食用菌都適宜，一般菌種可保藏2～4個月，所以需定時移接。此法保藏雖然方便，但是保藏時間短，需經常轉管，也很容易發生衰退變異現象。因此，不能用作長期保藏，最好與其他方法結合起來保藏。
另外，為了減少保藏期間培養基水分蒸發，瓊脂最好加到2.5%。為防止菌種在保藏過程中產酸分的積累，應加入0.2%的磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀等緩沖鹽類，同老汪時，培養成熟後，最好將棉塞管口外剪平，並用礦蠟封或換以無菌木塞，這樣做也可以減少培養基水分的散失，延長保存時間。
在毀芹農村如果沒有冰箱，可採用土法保藏。即把保藏用的斜面菌種換上無菌橡皮塞，並用礦燭蠟封後密閉的廣口瓶中，懸入井底保藏。（2）貯藏室保藏法原種和栽培種一般只在貯藏室短期保藏，貯藏室溫度0～10℃為好。室內應清潔、乾燥、無光，應經常檢查溫度和濕度，以降低其生活力，減少變異退化，防止雜菌污染，避免過早出菇。溫度越高，保存的時間越短。

『伍』 什麼是微生物菌種保藏

保藏御譽方法

1．傳代培養保藏法

又有斜面枯手培養、穿刺培養、皰肉培養基培養等（後者作保藏厭氧細菌用），培養後於4—6℃冰箱內保存。

2．液體石蠟覆蓋保藏法

是傳代培養的變相方法，能夠適當延長保藏時間，它是在斜面培養物和穿刺培養物上面覆蓋滅菌的液體石蠟，一方面可防止因培養基水分蒸發而引起鎮敗段菌種死亡，另一方面可阻止氧氣進入，以減弱代謝作用。

3．載體保藏法

是將微生物吸附在適當的載體，如土壤、沙子、硅膠、濾紙上，而後進行乾燥的保藏法，例如沙土保藏法和濾紙保藏法應用相當廣泛。

4．寄主保藏法

用於目前尚不能在人工培養基上生長的微生物，如病毒、、螺旋體等，它們必須在生活的動物、昆蟲、雞胚內感染並傳代，此法相當於一般微生物的傳代培養保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法與冷凍乾燥保藏法進行保藏。

5．冷凍保藏法

可分低溫冰箱（-20—-30℃，-50—-80℃）、乾冰酒精快速凍結（約-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法。

6．冷凍乾燥保藏法

先使微生物在極低溫度（-70℃左右）下快速冷凍，然後在減壓下利用升華現象除去水分（真空乾燥）。

『陸』 四大微生物最適合的保藏方法是什麼

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1、低溫定期移植保藏法。將需要保藏的菌種接種在適宜的斜面培養基上，適溫培養，當菌絲健壯地長滿斜面時取出，放在3-5℃低溫乾燥處或4℃冰箱、冰櫃中保藏，每隔4-6個月時間移植轉管一次，具體應根據菌種特性決定。保藏時要注意環境溫度不能太高，以防黴菌通過棉塞進入管內。因此，若用棉塞，可用干凈的硫酸紙或牛皮紙包紮棉塞，即可減少污染的機會，也可防止培養基乾燥。除草菇菌種外，其他食用菌菌種都能採用此法保藏。

2、液體石蠟保藏法。取化學純液體石蠟(要求不含水分、不霉變)裝於三角瓶中加棉塞並包紙，在1公斤/平方厘米壓力下滅菌1小時，再放入40℃恆溫箱中數天，以蒸發其中水分，至石蠟油完全透明為止。將處理好的石蠟油移接在空白斜面上，28-30℃下培養2-3天，證明無雜菌生長方可使用。然後用無菌操作的方法把液體石蠟注入待保藏的斜面試管中。注入量以高出培養基斜面1-1.5厘米，塞上橡皮塞，用固體石蠟封口，直立於低溫乾燥處保藏。保藏時間在一年以上，在低溫下，保藏時間還可延長。

3、沙土管保藏法。取河沙用水浸泡洗滌數次，過60目篩除去粗粒，再用10%鹽酸浸泡2-4小時豎族攜，除去其中有機物質，再用水沖洗至流水的ph達到中性，余伏烘乾備用。同時取貧脊土或菜園土用水浸泡，使呈中性，沉澱後棄去上清液，烘乾碾細，用100目篩子過篩，將處理好的沙與土以(2-4):1混勻，用磁鐵吸出其中的鐵質，然後分裝小試管或安瓿內，每管裝量0.5-2克，塞棉塞，用紙包紮滅菌(1.5公斤/平方厘米，1小時)，再乾熱滅菌(160℃，2-3小時)1-2次，進行無菌檢驗，合格後使用。將已形成孢子的斜面菌種，在無菌條件下注入無菌水3-5毫升，刮菌苔，製成菌懸液，再用無菌吸管吸取菌液滴入砂土管中，以浸透砂土為止。將接種後的沙土管放入盛有乾燥劑的真空乾燥器內，接上真空泵抽氣數小時，至沙土乾燥為止。真空乾燥操作需在孢子接入後48小時內完成，以免孢子發芽。制備好的沙土管用石蠟封口，在低溫下可保藏2-10年。

4、濾紙片保藏法。取白色(收集深色孢子)或穗虧黑色(收集白色孢子)濾紙，剪成4×0.8厘米的小紙條，平鋪在培養皿中用紙包裹進行滅菌(1公斤/平方厘米，30分鍾)。採用鉤懸法收集孢子，讓孢子落在濾紙條上。將載有孢子的濾紙條放入保藏試管中，再將保藏試管放入乾燥器中1-2天，除去濾紙水分，使濾紙水分含量達2%左右，然後

『柒』 菌種保藏的目的，菌種保藏的方法有哪些

1、目的：盡可能的保持菌種的原有性狀以及活力的穩定，保證菌種不死亡、不發生變異、不被外物污染，保持菌株的優良性狀不發生退化以及優良菌株的存活。2、原理：通過降低微生物體內的代謝，抑制生長繁殖，從而延長菌種的生命，減少變異，常用的方法為低溫保藏、缺氧保藏、乾燥保藏。

一、菌種保藏的目的

1、目的

在使用和傳代的過程中，菌種容易出現污染，發生變異，死亡等情況，從而導致菌種衰退，優良菌種丟失。而菌種保藏的目的就是為了盡可能的保持菌種的原有性狀以及活力的穩定，保證菌種不死亡、不發生變異、不會被外物污染，保持菌株的優良性狀不發生退化以及優良菌株的存活。

2、原理

菌種保藏的原理是通過降低微生物體內的代謝，抑制生長繁殖，從而延長菌種的生命，減少變異。常用的方法主要為低溫保藏，缺氧保藏，乾燥保藏。除此之外，避光，添加保護劑，缺乏營養等也可以提高保藏的效果。

二、菌種保藏的方法有哪些

1、斜面低溫保藏法

將菌種接種到適合的固體斜面培養基上，等到菌種充分生長過後，使用油紙將棉塞部分包紮好，然後轉移至2-8℃的冰箱中進行保存。

2、液體石蠟保藏法

（1）使用三角燒瓶將液體石蠟裝好，塞上棉塞，並用牛皮紙進行包紮，0.1MPa，121.3℃滅菌30分鍾左右，然後轉移至40℃的溫箱中，將水汽蒸發掉。

（2）將菌種在斜面培養基中培養，得到健壯的菌體，然後使用滅菌吸管將石蠟注入斜面上，用量為高出斜面頂端1cm為宜。

（3）將試管直立，放置在低溫或者室溫的環境下進行保存。

3、濾紙保藏法

（1）准備好濾紙條（0.5×1.2cm），裝入安瓿管中（0.6×8cm），每個管中放入1-2張，然後塞上棉塞，在0.1MPa，121.3℃的環境下滅菌30分鍾。

（2）將菌種在斜面培養基中培養，得到健壯的菌體，然後取出1-2ml的滅菌脫脂牛乳，滴加在滅菌培養皿內，接著取數環菌苔在牛乳內混合均勻，製成濃懸液。

（3）使用鑷子將濾紙條夾出，浸入菌懸液內，吸飽後，放回安瓿管中，塞上棉塞。

（4）將安瓿管放入裝有五氧化二磷的乾燥器，並用真空沖慎泵抽氣至干，然後將棉花塞入管內，用火焰熔封，放置在低溫下保存。

（5）當需要使用菌種的時候，將安瓿管口在火焰上燒熱，在燒熱的部位滴上一滴冷水，使玻璃破裂，再用鑷子將瓶口端的玻璃敲掉，等到打開安瓿管後，將濾紙取出，放入液體培養基內，置溫箱中培養。

4、沙土保藏法

（1）取出河沙，加入10%稀鹽酸，加熱煮沸30分鍾（除去有機質）。

（2）將酸水倒掉，並用自來水將河沙洗至中性，然後進行烘乾，過篩（40目篩子），將粗顆粒去掉。

（3）取非耕作層的不含腐植質的瘦黃土或紅土，浸泡洗滌數次，直至為中性。

（4）烘乾，碾碎，過篩（100目篩子），去除粗顆粒。

（5）將沙和土按照2：1的比例混合，裝入試管中，塞好棉塞，滅菌配並30分鍾左右。

（6）將菌種在斜面培養基中培養，得到健壯的菌體，然後向斜面培養物中注入3-5ml無菌水，洗下細胞或孢子製成菌懸液。

（7）用無菌吸散賣敬管吸取菌懸液，均勻滴入沙土管中，每管0.2-0.5ml，然後真空抽去管中的水分。如果是放線菌和黴菌可以直接挑取孢子拌入沙土管之中。

（8）將沙土管用火焰熔封，然後放置在低溫（4-6℃）乾燥處保藏，或者是將沙土管直接用牛皮紙或塑料紙包好，置乾燥器內保存。保存過程中，需要每隔半年檢查一次菌種的存活性和純度。

5、甘油管保存法

（1）將80%的甘油進行高壓蒸汽滅菌。

（2）將菌種放置在斜面培養基上培養，然後使用無菌水製成高濃度的菌懸液。

（3）使用1ml的甘油與菌液混合均勻，讓甘油的濃度為10-30%左右，然後將其放置在零下70℃的環境下進行凍存。

（4）也可以使用甘油-生理鹽水（體積比8：2），和菌體肉湯混合均勻，然後放置在零下20℃的環境下進行保存。

6、冷凍乾燥保藏法

（1）在低溫下將細胞快速凍結，然後在真空條件下進行乾燥，同時為了保證細胞在冷凍和水分升華的過程中不受損害，應當使用保護劑來制備細胞細胞懸液（菌在凍結和脫水過程中起到保護作用的溶質），通過氫鍵和離子鍵對水和細胞所產生的親和力來穩定細胞成分的構型。

（2）乾燥後的菌種在真空下封裝，和空氣隔絕，從而實現長期保藏。

（3）該方法兼具低溫、乾燥、除氧三方面菌種保藏的主要因素，除開絲狀真菌的菌絲體外，其它各類微生物大多都適用。

『捌』 菌種保藏的原理，菌種保藏方法

1、菌種保藏的原理：菌種保藏有多種方法，其原理大多大同小異，主要是人為創造條件盡量降低生物體內的代謝活動，以達到延長生命、減少變異的目的，其中低溫、乾燥和隔絕空氣是使微生物代謝能力降低的團慎重要因素。2、菌種保藏方法：菌種保藏常用的方法有凍干保藏法、液氮保藏法、甘油管冷凍保藏法、傳代培養保藏法、寄主保藏法、載體保藏法等。

一、菌種保藏的原理

1、菌種保藏的原理是根據菌種的生理生化特性，人為創造條件盡量降低生物體內的代謝活動，以達到延長生命、減少變異的目的。在保藏過程中，必須使微生物的代謝處於最不活躍或相對靜止的狀態，才能在一定的時間內使其不發生變異而又保持生活能力。

2、低溫、乾燥和隔絕空氣是使微生物代謝能力降低的重要因素，因此菌種保藏方法雖多，但都是根據這三個因素而設計的。其中低溫可減緩機體細胞的酶活，降低新陳代謝，達到保藏菌種的目的，同時會導致菌體誘發菌絲自溶機制。

二、菌種保藏方法

常用的方法有凍干保藏法、液氮保藏法、甘油管冷凍保藏法、傳代培養保藏法、寄主保藏法、載體保藏法等。

1、凍干保藏法

凍干保藏法是最有效的方法之一，具體為：先使微生物在極低溫度（豎兆-70℃左右）下快速冷凍，然後在減壓下利用升華現象除去水分（真空乾燥），其中真空冷凍乾燥法最常見。

2、液氮保藏法

液氮保藏法，又稱為塌纖敬超低溫保藏法，主要利用微生物在低於-130°C的低溫下新陳代謝趨於停止的原理，在液氮中（-196°C的超低溫下）有效地進行菌種保藏的方法。該方法一般可保藏15年以上，是公認的菌種長期保藏技術之一。

3、甘油管冷凍保藏法

甘油管冷凍保藏法，利用微生物在甘油中生長和代謝受到抑制的原理達到保藏目的。該方法適用於一般細菌的保存，同時也適用於鏈球菌、弧菌、真菌等需特殊方法保存的菌種，適用范圍廣，操作簡便，效果好，無變異現象發生。

4、傳代培養保藏法

傳代培養保藏法，又稱定期移植保藏法，包括斜面培養、穿刺培養、皰肉培養基培養等，是指將菌種接種於適宜的培養基中，最適條件下培養，待菌種生長完全後，通常置於4℃-6℃進行保存並間隔一定時間進行移植培養的菌種保藏方法。

5、寄主保藏法

寄主保藏法相當於一般微生物的傳代培養保藏法，必須在生活的動物、昆蟲、雞胚內感染並傳代，尚不能用於在人工培養基上生長的微生物，如病毒、立克次氏體、螺旋體等。

6、載體保藏法

載體保藏法，將微生物吸附在適當的載體如土壤、沙子、硅膠、濾紙上，而後進行乾燥的保藏法，例如沙土保藏法和濾紙保藏法應用相當廣泛。