怎麼利用細胞融合技術

Ⅰ 細胞融合的基本原理和方法

1、病毒誘導助融：

細胞融合在自然界是存在的，細胞融合研究首先也是基於自發的細胞融合，1957年，岡田善雄意外發現仙台病毒，能誘導懸液中艾氏腹細胞融合，然手褲後Harris、Kada等用於誘導種間細胞融合，獲得成功。

2、化學助融：

1972年，卡爾森首先用硝酸鈉進行煙草兩個種的細胞原生質體的融合，1974年Kao等首先發現聚乙二醇能誘導植物細胞原生質體融合產生雜交細胞。1975年Pentecorvo，發現聚乙二醇亦能幫助哺乳類動物細胞的融合，1976年Davidson更進一步證實這一結果，並且認為其具有簡單快速、高檔正效率等優點。因而，1975年之後聚乙二醇就逐漸取代了仙台病毒.

3：電融合法：

電融合法是70年代未期和80年代初期發展起來的一種新的細胞融合方法。Senda在1970年首先應用電脈沖，通過微電極在顯微鏡下使植物細胞融合，奠定電融合技術基礎。

4、激光誘導卵細胞融合：

激光誘導卵細胞融合是最新的細胞融合方法，該法為張聞迪等人首先應用，他們利用激光微束的單色性、高功率密度、短脈寬和畢蠢簡極小的作用范圍等特點。對泥鰍受精卵進行融合試驗，獲得成功，且融合後的細胞可存活發育，經卵裂期、囊胚期、原腸期、孵化期、直至幼魚。整個過程可通過顯微鏡觀察，還可同時由電視攝象監視器觀察和進行照相記錄。.

Ⅱ 細胞融合的方法有哪些

一、細胞融合的方法有三種：生物方法、化學方法、物理方法。
二、細胞融合也稱細胞雜交 , 是指細胞通過介導和培養, 在離體條件下用人工方法將不同種的細胞通過無性方式融合( 合並) 成一個核或多核的雜合細胞的過程。體細胞融合後可形成四倍體或多倍體細胞，由此形成的雜交細胞，其特性會有很大的變化。
三、化學誘導融合1.鹽類融合法。此法是應用最早的誘導原生質體融合的方法。鹽類融合劑對原生質體的破壞小。今後研究應提高其融合率 ,使其對液泡化發達的原生質體能夠誘發融合。2高鈣和高pH值融合法。高 Ca2+和高pH值可以誘發融合。提高該方法的使用范圍是亟待解決的問題。3、聚乙二醇融合法(PEG法) 。1974年發現的聚乙二醇(PEG)使不同科屬的植物原生質體之間都可以融合，融合率可達30%。聚乙二醇是乙二醇的多聚扮隱化合物，存在一系列不同分子量的多聚體。PEG可與水分子借氫鍵結合，導致細胞脫水而發生質膜結構的變化，從而引起細胞融合。為了發揮PEG促進細胞融合的效力，必須採用較高的濃度(40%～50%，分子量為6000)，但PEG在高濃度下，細胞可能因脫水而受到顯著的破壞。因此，選擇合適的分子量、濃度及作用時間是PEG融合技術的關鍵。影響原生質體融合的因素很多。特別是環境中的陽離子存在，融合時的pH 也對原生質體融合有較明顯的影響。一般來講鈣、鎂離子有助於融合。如有鈣離子存在時，可得到較高的融合率。但在缺乏鈣離子時，若pH 較低，融合頻率也較高。這是因為鈣離子和帶負電荷的PEG與細胞膜表面分子相互作用，使原生質體帶電老沖，彼此易於附著發生凝集所致。PEG誘導細胞融合由於具有容易制備和控侍缺殲制、活性穩定、使用方便等特點，在細胞融合領域取得了可喜的成績，大量的研究仍採用此法。雖然PEG作為融合劑有很多成功的報道，但存在著對細胞損傷大、殘存有毒性、融合率較底及經驗性大等缺陷。
四、 物理誘導融合1。細胞電融合技術細胞電融合是以脂質膜和脂質一蛋白質膜的電學性質為基礎的，以雙向電泳和電子擊穿細胞質膜的聯合作用為手段，和細胞電注射構成一對互補技術。在短時間強電場的作用下，細胞膜發生可逆性電擊穿(Reverisb leb reakdown)，瞬時失去其高電阻和低通透特性，然後在數分鍾後恢復原狀。當可逆電擊穿發生在兩個相鄰細胞的接觸區時，即可誘導他們的膜相互融合，從而導致細胞融合。細胞融合分為兩步：第一步是建立細胞間接觸(cell-to-cell contact) ； 第二步，接受區膜結構受擾動而紊亂，然後恢復並融合。根據其誘導細胞接觸的性質，分為特異性和非特異性兩大類。非特異性細胞電融合法是指在進行細胞電融合時，無法排除親本細胞的自體融合而只進行雙親本間的細胞雜交融合。主要原因是細胞間的相互接觸是無選擇性的，是非特異性細胞聚集。非特異性電融合技術包括細胞物理聚集電融合法和細胞化學聚集電融合法。細胞融合所必需的兩個步驟為：①細胞間接觸；②接觸區的膜結構受到瞬間擾動而導致融合。只要其中的任意一步有特異性，就能形成特異性的細胞融合。 2.激光誘導法。激光誘導細胞融合術是利用激光微束對相鄰細胞接觸區的細胞膜進行破壞(或擾動)，可將兩個不同特性、不同大小的細胞在顯微鏡下實現融合。即利用光鑷捕捉並拖動一個細胞使之靠近另一個細胞並緊密接觸，然後對接觸處進行脈沖激光束處理，使質膜發生光擊穿，產生微米級的微孔。這樣，由於質膜上微孔的可逆性，細胞開始變形融合，最終成為一個細胞。使用此技術時，使細胞接觸的方法可用①光俘虜法；②用低濃度的融合劑PEG (5% )使細胞聚法。目前，最新穎的方法是利用激光光阱建立兩細胞間接觸，即光鑷利用激光高斯光束光場的梯度力把細胞從光束邊緣拉向光束中間，在光斑直徑與光波波長尺度相比擬時，指向束腰的軸向梯度力要大於沿光束方向的散射力，該梯度力把細胞豎直地拉到激光束腰下方處，從而實現對細胞的操作。 

Ⅲ 動物細胞融合的主要方法

動物細胞融合的主要方法病毒法;聚乙二醇法;電融合法。

相關內容：

誘導動物細胞融合的方法有：物理法（離心、振動）、化學法(聚乙二醇)、生物法(滅活的病毒)。

（3)生產單克隆抗體一般不直接培養免疫過的B淋巴細胞,主要原因是B淋巴細胞不能無限增殖,因此選用骨髓瘤細顫逗胞與B淋巴細胞融合,從而使融合後的雜交瘤細胞具有既能迅速大量增殖,又能產生專一的抗體的特性。

Ⅳ 細胞融合技術的應用

細胞融合技術的應用如下：

細胞融合技術是用自然的或人為的方法，使種類不同的兩種生物細胞直接融合，產生能夠同時表達二者有益性狀新雜種細胞的技術。自然進行的細胞融合，即卵子和精子受精形成合體，只能發生在同一種生物或親緣關系很近的生物種之間。

一年後核吵鏈，又進一步使用仙台病毒獲得了能夠增殖的雜種細胞。此後，人工誘導體細胞融合方法作為一種新的生物工程技術已廣泛地用於種內、種間、屬間、科間乃至動、植物的雜種細胞的構建。該法無論在生物學的基礎理論研究方面，或工、農、醫等應用方面，均具有廣闊的前景。

Ⅳ 如何利用細胞融合技術3

科學家利用細胞融合技術研究細胞膜的特性，進行了下列實驗．
（1）將鼠細胞和人細胞在CO2培養箱中培養一段時間，用胰蛋白酶 處理，獲取實驗用的單個細胞．
（2）將兩種細胞在37℃下混合培養，在培養液中加入（滅活的）病毒 誘導融合，形成融合細胞．
（3）細胞膜的主要成分是磷脂 和蛋白質．將連接了熒光染料的抗體與融合細胞在一定條件下培養，抗體與融合細胞的膜蛋白（抗原）特異性結合，其目的是標記 膜蛋白，以猜春便於顯微鏡觀察．用熒光顯微鏡觀察融合細胞表面熒光的顏色和分布 ．開始時，鼠的細胞為綠色，人的細胞為紅色，兩種顏色不混合；一段時間後，可觀察到紅綠熒光交替分布的「嵌合體」．統計嵌合體比例 ，結果如圖所示．
（4）科學家據此提出兩種解釋嵌合伍哪體形成的假說．假說一：融合細胞合成了新的膜蛋白；假說二：原有膜蛋白在細胞膜平面上運動．
①使用蛋白質合成 抑制劑和ATP合成抑制劑分別處理融合細胞，均對嵌合體形成沒有顯著影響，這個結果否定了假說一．
②在15℃、20℃和26℃的培養溫度下重復上述實驗，這些實驗的結果為隨著溫度增加，嵌合體比例增加（或「隨著溫度降低，嵌合體比例降低」） ，為假說二提供了證據支持．
（5）上述實驗表明，細腔兆碼胞膜結構具有（一定的）流動性 ．