1. 免疫磁珠細胞分選的簡介
把細胞用超級順磁性的 MACS MicroBeads (MACS微型磁珠)特異性地標記,磁性標記完後,把這些細胞通過一個放在強而穩定磁場中的分選柱。分選柱里的基質造成一個高梯度磁場。被磁性標記的細胞滯留在柱里而未被標記的細胞則流出。當分選柱移出磁場後,滯留柱內的磁性標記細胞就可以被洗脫出來,這樣就完全可以獲得標記和未標記的兩個細胞組份。
超順磁性的MACS MicroBeads 的體積很小,其直徑約為50nm,體積約小於真核細胞的一百萬份之一,可與病毒的大小相比。標記細胞上的微型磁珠即使在掃描電鏡照片上也幾乎看不到。磁性抗體和磁性標記物間的反應可在幾分鍾內完成。
由於微型磁珠的體積極小,所以不會對細胞造成機械性壓力,而且使孵育時間短,操作圓悔過程快。MicroBeads 形成一個穩定的膠體液,它們在磁場中既不沉澱又不凝聚。微型磁珠的大小和它的組成成份(氧化鐵和多糖)使其可被生物降解,且不會激活細胞或影響細胞的功能和活力,細胞的生理功能也不變。磁珠不需要去除,因此,陽性分選出的細胞(即磁性標記細胞)可立即用於分析和隨後的實驗。
用MACS 細胞分選系統可以分離舉賣出非常純的細胞群體,而且有極好的回橘答正收率和存活率。依據細胞頻率和標記表達水平的不同,MACS分離細胞的純度可達95%-99.9%,回收率>90% 。
2. 在實驗中,經常提取核酸的時候有很多方法,其中磁珠法是什麼意思,有什麼好處
傳統的核酸分離技術包含沉澱,離心等過程歷孝,這些純化方法的步驟繁雜、費時長、收率低,接觸有毒試劑,很難實現自動化操作;而採用磁性載體微球分離技術就能很好地克服這些缺點,實現樣品的快速、高效制備.
磁珠法提取核酸是通過細胞裂解液裂解細胞,從細胞中游離出來的核酸分子被特異的吸附到磁性顆粒表面,而蛋白質等雜質不被吸附而留在溶液中。反應一定時間之後,再在磁場作用下,慧肆使磁性顆粒與液體分開,回收顆粒(即磁珠-DNA 混合物),再用洗脫液洗脫即可以得到純前爛轎凈的DNA。
3. 免疫磁珠法可以分離Th1和Th2細胞嗎
免疫磁珠法可以分離Th1和Th2細胞
(以下轉載)
免疫磁珠法 (MACS):免疫磁珠法是 2O世紀 80年代出現的技術方法。1983年 Ugelstad提出將免疫磁珠用於細胞分選,1990年,Mihenyi建立了 MACS。這一方法的核心是在磁珠表麵包被具免疫反應性的抗體進行抗原抗體反應,在細胞埋滾睜表面形成玫瑰花結,這些結合了磁珠的細胞一旦置於強大的磁場下,就會與其他未被結合的細胞分群,具超強順磁場的磁珠脫離磁場後立即消失磁性,這樣就可以篩選或去除所標記的細胞 ,從而達到陽性或陰性選擇細胞的目的。這一技術 目前已經廣泛運用於細胞備祥及分子生物學,分離基因、靶細胞及造血幹細胞等。其分離效果得到了免疫熒光、PCR、FISH及 FACS等方法的確認。免疫磁珠可以有效地分選細胞,從而決定了這一方法在神經幹細胞分選中應 用的技術可行性 。
CD4+亞群(Th細胞)根據自身所分泌的細胞因子,分為Th1和Th2兩個亞群。Th1細胞主要分泌IL-2、IFN- γ和TNF-β 等細胞因子。Th1細胞主要介導細胞免疫反應,在誘發器官特異性自身免疫病,器官移植排斥反應和抗感染免疫中起著重要的免疫調節作用。Th2細胞主要分泌IL-4、IL-5、IL-6、IL-10和IL-13。Th2細胞主要調節體液免疫反應,在彎歲誘發過敏反應中起著決定性的作用。
4. 血小板分離純化技術的先進分離技術
免疫磁珠分選技術
免疫磁珠分選技術(MACS)是高效簡捷的血小板分離純化方法。MACS是利用血小板表面標志CD61進行分離的。將單克隆抗CD61-PE包被在磁珠上,然後包被上單克隆抗體的磁珠與血小板特異性結合。磁珠攜帶著與之結合的血小板吸附於分離柱上,沒有與磁珠結合的陰性細胞流出,從而實現了血小板的分離。
用MACS細胞分選系統可以分離出非常純的血小板,純度可以達到80%-99%,連續兩次過柱分選可進一步提高血小板純度,通常可大達95%-99%,回收率在90%以上。而且,由於微型磁珠的體積極小,其直徑只有50nm,所以不會對血小板造成機械性壓力,而且使孵育時間短,操作過程快。MicroBeads形成一個穩定的膠體液,它們在磁場中既不沉澱又不凝聚。微型磁珠的大和它的組成成分(氧化鐵和多糖)使其可被生物降解,且不會激活細胞或影響細胞的功能和活力,細胞的生理功能也不會改變。磁珠不需要去除,因此,陽性分選出的細胞可立即用於分析和隨後的實驗。如果操作得當,其分離效果與流式細胞術的血小板分離效果基本處於同一水平,並還具有比流式細胞儀的分離更省時,費用低,及操作簡單等優勢。
流式細胞術
流式細胞分選技術是目前最先進的分離純化技術之一。血液中的血小板在激光束的照射下發出散射光和熒光,經探測器檢測,轉換為電信號,經計算機處理,被確認為CD61陽性細胞,超聲壓電晶體通電後發生高頻震動,使細胞流動室噴咀流出的液流戚攜束斷成一連串均勻的液滴,每秒鍾形成液滴上萬個,每個液滴包含著一個樣品細胞。CD61陽性的血小板被充電,在通過偏轉的高壓靜電場時向左或向右偏轉被收集在指定的容器高行伏中。陰性細胞不發生偏轉進入中間廢液收集器中,從而實現了分選。
流式細胞儀分離細胞速度大概為4500000個帶洞每小時,經分選可獲得高純度、高回收率及高活細胞率,所分離的血小板仍然可保持無菌、原有結構和生物活性。上述特點決定流式細胞術分離血小板無疑可獲得最佳效果。但該方法的限制性,首先在於費用昂貴,需要流式細胞儀這樣的特殊設備,其次所需時間相對較長,如加大壓力和流速,則造成了細胞的損失,因此,人們常常在流式細胞分選血小板前,作其分離的預分離,分離出富血小板血漿,以提高血小板在樣本中所佔的比例,從而可以提高壓力和流速,節省時間。