如何用PCR技術對核酸進行檢測

A. 簡述PCR技術操作步驟

PCR即聚合酶鏈式反應（Polymerase chain reaction）的縮寫，它是體外酶促合成特異DNA片段的方法。這一方法的要點是合成兩個分別互補於待擴增DNA片段兩端的小片段引物，在含有引物、待擴增DNA模板核苷酸底物和DNA多聚酶的反應體系中DNA復制反復進行，在短時間內可以取得大量擴增產物。其原理是寡聚核苷酸鏈引物在DNA聚合酶的作用下沿模板延伸，合成兩個與靶DNA兩側序列互補的引物，在體外進行靶DNA的重復合成。
主要的技術步驟是：
（1）DNA變性 加熱使靶DNA序列雙鏈解離成單鏈DNA。
（2）引物與靶DNA退火 適當降低溫度，使兩個引物分別結合成靶DNA兩條的3′末端向5′末端延伸。
（3）引物延伸 在DNA聚合酶的催化下，引物沿著靶DNA3′末端向5′末端延伸。新合成的DNA鏈在變性解離後，又可作為模板與引物雜交，並且在DNA聚合酶的催化下，引導合成新的靶DNA鏈。如此反復進行以上3個步驟，即可使靶DNA片段指數性擴增。

B. 什麼是核酸檢測怎麼檢測

核酸檢測是在實驗室的條件下，通過分析致病微生物DNA或者RNA基因學的序列，進行臨床病因學的確診。此種核酸檢測的方法是利用PCR擴增的方法進行檢測，需要很多的步驟，最快也要6個小時才能出結果。此種檢測靈敏度高、成本高，完全手工操作，工作量非常大，同時要求實驗室的條件也非常高。它是目前及早確定病人是否感染病毒，以及及早發現和及早治療最有效的檢測方法新型冠狀病毒核酸檢測的方法，目前採用的是實時PCR熒光法這種PCR熒光法也叫聚合酶鏈式反應，是通過一種分子生物學的技術用來放大這種極少見的RNA病毒。可以將新冠病毒RNA片段擴增到百萬倍以上，這樣更容易檢測出新冠病毒

C. 核酸病毒檢測有PCR和快檢，這兩個檢測方式有什麼區別

檢驗核酸病毒有PCR和快檢兩種方式，一般常規PCR檢測是在樣品採集之後，要對樣品進行核酸純化，再進行後續的PCR反應，在這個過程中大約需要30~60分鍾。在進行PCR檢測的過程中，可以進行多個樣本的檢測，PCR反應的時間大約在兩個小時左右。不同醫院的儀器設備不同，儀器的好壞能夠影響檢測樣本的多少，通常一個反應板可以同時檢測96個樣品。

醫護人員採集人們的少量咽拭子，根據其中病毒的濃度來確定是否是陽性，還是陰性。新冠肺炎病毒的核酸物質主要是RNA，在檢驗過程中通過技術可以將RNA進行逆轉錄，轉化為DNA。 PCR技術可以通過特殊的酶在生物體外，對轉錄的DNA片段進行復制，再將DNA片段擴大，從而達到檢測的目的。選擇核酸檢測的方式主要根據自己情況而定，主要依靠醫生的判斷。