⑴ 病理切片一般要用到那一種顯微鏡
癌細胞病理切片在顯微鏡放大幾倍,才能區別出它與正常細胞問題補充:醫院病理用100X.200X.400X這幾個倍數看就行!200X用的會多一些. 哪一種癌
⑵ 試以某一生物樣本做透射電鏡觀察,採用超薄切片法制備樣本,詳細論述處理過程
摘要 在透射電鏡的樣品制備方法中,超薄切片技術是最基本、最常用的制備技術。超薄切片的製作過程基本上和石蠟切片相似,需要經過取材、固定、脫水、浸透、包埋聚合、切片及染色等步驟。
⑶ 負染色電鏡技術要超薄切片么如果不切片用什麼顯微鏡觀察
不用進行超薄切片,只要用電子顯微鏡觀察就可以了.
⑷ 填空題 電鏡超薄切片技術包括( )、( )、( )、( )等四個步驟
電鏡超薄切片技術包括(固定)、( 包埋)、(切片 )、(染色 )等四個步驟
⑸ 石蠟切片技術和超薄切片技術有什麼區別求答案
石蠟切片不僅用於觀察正常細胞組織的形態結構,也是病理學和法醫學等學科用以研究、觀察及判斷細胞組織的形態變化的主要方法,而且也已相當廣泛地用於其他許多學科領域的研究中。教學中,光鏡下觀察切片標本多數是石蠟切片法制備的。活的細胞或組織多為無色透明,各種組織間和細胞內各種結構之間均缺乏反差,在一般光鏡下不易清楚區別出;組織離開機體後很快就會死亡和產生組織腐敗,失去原有正常結構,因此,組織要經固定、石蠟包埋、切片及染色等步驟以免細胞組織死亡,而能清晰辨認其形態結構。
超薄切片技術由於電鏡產生的電子束穿透能力很弱,必須把標本切成厚度小於0.1um以下的薄片才適用,這種薄片稱為超薄切片。常用的超薄切片厚度是50-70nm。在透射電鏡的樣品制備方法中,超薄切片技術是最基本、最常用的制備技術。超薄切片的製作過程基本上和石蠟切片相似,需要經過取材、固定、脫水、浸透、包埋聚合、切片及染色等步驟。
⑹ 超薄切片技術操作過程是什麼
觀察病毒在細胞組織內的狀態,可採取超薄切片技術,將標本用固定液固定後,經過脫水滲透包埋聚合切片等過程,切成薄片然後染色檢鏡。
(1)固定。
常用的固定液主要有鋨酸固定液、醛固定液、高錳酸鹽固定液等。
①鋨酸固定液:這是最常用的固定液,作用迅速,新鮮的鋨酸呈淺黃色,其蒸氣極毒,使用時應在強通風櫃中把裝有鋨酸的安瓿瓶在緩沖液內敲碎。
②醛固定液:植物材料具有厚壁,鋨酸固定液不能很好滲透,有時固定得不好。而醛固定液往往可獲得較好效果,同時還不會破壞酶的活性,可以在切片上進行組織化學測定。常用的有甲醛固定液和戊二醛固定液。
③高錳酸鹽固定液:此種固定液可保持膜的結構,但破壞核糖體並失去酶的活性,對維持TMV粒子在細胞內的排列比戊二醛及鋨酸固定液好。
緩沖液可用1%液體鋨酸和1%過錳酸鉀,也可用磷酸鹽巴比妥-醋酸和二甲胂酸鹽緩沖液。固定可在0~5℃或室溫下進行,供試材料盡可能使用幼嫩的植株,小的根可整個固定,葉片需剪成1~2cm的小塊。葉中的空氣會阻止固定液與大部分細胞接觸,可在真空下把空氣除去。
組織固定後必須徹底沖洗,在進行鋨酸固定前要把多餘的醛用緩沖液沖洗徹底。固定後的組織一定要進行脫水,特別是採取不溶於水的樹脂包埋時,在室溫低於4℃時,丙酮或乙醇脫水效果都很好。
(2)包埋。
包埋用的樹脂可分為四類,即甲基丙烯酸酯、環氧樹脂、聚酯樹脂和各種水溶性化合物。
甲基丙烯酸酯在聚合過程中可能引起組織損傷,在電子束轟擊下,這種介質有升華的趨向,引起細微組織結構的破壞。但甲基丙烯酸酯也有優點,它比環氧樹脂能切出較大的切塊切面,切片也容易染色。
環氧樹脂和聚酯樹脂是保存細胞細微結構的最好包埋材料,目前最常用的環氧樹脂是Epon和Araldite,用它包埋的標本可避免聚合損傷,樹脂切片在電鏡下不升華,可使標本連續觀察,並保存細微結構。
水溶性樹脂劑對一些不希望用有機溶劑脫水,或利用組織切片做酶外處理試驗特別有用,其缺點是不能很好地保持細胞的細微結構。
組織需在包埋介質中充分滲透,常用的有兩種方法:
①環氧樹脂包埋組織的滲透。將丙醇脫水的組織轉到裝有6ml由等量丙酮和環氧樹脂的標本管中,將標本管放在烤箱內由傾斜45°角的馬達帶動的輪上,使其不斷轉動,丙酮由開口的管中蒸發,當丙酮味消失後,將組織在擦鏡紙上吸干,浸入新鮮的樹脂中,再於同一溫度下放4h,再一次吸干組織後,移到裝有新鮮樹脂的膠囊內,將Epon塊放在40℃下,直至完全變硬,並繼續在60℃下凝固12h。
②水溶性樹脂包埋組織的滲透。將組織在戊二醛中固定,在緩沖劑中沖洗1~12h,然後在80%GMA單體和20%的水中脫水20min,再於97%GMA單體和3%的水中繼續脫水20min後,在制備的聚合混合物中滲透過夜。將組織放在烘爐內的明膠膠囊中,注滿聚合混合物除去所有空氣泡,蓋好使其不使與空氣接觸,把膠囊用金屬絲垂直吊起,用長波長的紫外光聚合1~3d即可。
(3)切片。
切片前切去埋塊四周的樹脂,留下高2~3mm的標本正方柱,裝入切片機,使埋塊面的平行邊與刀口平行,把刀慢慢向標本推進,通過切片機上的目鏡系統,把刀推到看不到有間隙之處,每次推進0.5~1.0μm,直到切下切片。切片厚度以能達到浮於液面的切片呈灰色為最好。切片可用醋酸雙氧鈾和檸檬酸鉛進行染色。染色後的切片在0.1N氫氧化鈉中沖洗,然後用水沖洗。
⑺ 電子顯微鏡下觀察不需經超薄切片的樣品時,通常用哪些染色方法
電子染色是利用重金屬鹽對用於電鏡觀察的超薄切片進行染色,以增強標本反差的一種染色方法。重金屬有增強電子散射的作用,不同結構因染色程度不同而具有不同的散射強度,在電鏡下顯示為不同的明暗反差。
光學染色是利用可見光的透射分辨觀察對象的,通過染料著色,將對象的不同組分或組織、性質加以區別。
總的說,前者是為了增大電子束的區分度,後者是為了增加可見光的區分度。
⑻ 石蠟切片技術和超薄切片技術有什麼區別
石蠟切片(paraffin section) 組織學常規製片技術中最為廣泛應用的方法。石蠟切片不僅用於觀察正常細胞組織的形態結構,也是病理學和法醫學等學科用以研究、觀察及判斷細胞組織的形態變化的主要方法,而且也已相當廣泛地用於其他許多學科領域的研究中。教學中,光鏡下觀察切片標本多數是石蠟切片法制備的。活的細胞或組織多為無色透明,各種組織間和細胞內各種結構之間均缺乏反差,在一般光鏡下不易清楚區別出;組織離開機體後很快就會死亡和產生組織腐敗,失去原有正常結構,因此,組織要經固定、石蠟包埋、切片及染色等步驟以免細胞組織死亡,而能清晰辨認其形態結構。
超薄切片技術由於電鏡產生的電子束穿透能力很弱,必須把標本切成厚度小於0.1um以下的薄片才適用,這種薄片稱為超薄切片。常用的超薄切片厚度是50-70nm。在透射電鏡的樣品制備方法中,超薄切片技術是最基本、最常用的制備技術。超薄切片的製作過程基本上和石蠟切片相似,需要經過取材、固定、脫水、浸透、包埋聚合、切片及染色等步驟。
⑼ 什麼是超薄切片技術
由於電鏡產生的電子束穿透能力很弱,必須把標本切成厚度小於0.1um以下的薄片才適用,這種薄片稱為超薄切片。常用的超薄切片厚度是50-70nm。在透射電鏡的樣品制備方法中,超薄切片技術是最基本、最常用的制備技術。超薄切片的製作過程基本上和石蠟切片相似,需要經過取材、固定、脫水、浸透、包埋聚合、切片及染色等步驟。
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