單克隆抗體用什麼技術解決

Ⅰ 什麼技術是單克隆抗體技術的基礎

動物細胞培養技術是單克隆抗體技術的基礎。

動物細胞培養就是從動物機體中取出相關的組織，將它分散成單個細胞（使用胰蛋白酶或膠原蛋白酶）然後，放在適宜的培養基中，讓這些細胞生長和增殖。

克隆抗體技術中，首先制備細胞培養基、 氨基喋呤（A）貯存液、次黃嘌呤和胸腺嘧啶核苷（HT）貯存液等各種細胞生長所需的營養物質。然後制備髓瘤細胞和脾淋巴細胞，之後進行細胞融合。

(1)單克隆抗體用什麼技術解決擴展閱讀

動物細胞培養中，原代細胞來源於一塊碎的或酶消化的組織。原代培養物，是多種類型細胞的混合物，保留了其來源組織的特點。

一段時間後，原代培養的細胞會達到融合狀態，即在培養瓶中的所有可用空間由於細胞擴增都被覆蓋。在此之後，細胞需要消化（通常用蛋白水解酶，如胰蛋白酶）為單個細胞並且傳代（分裂，傳代或轉移）。

在第一次傳代以後，培養物通常被稱為一個細胞系。每一次傳代培養，細胞群體由於快速生長的細胞佔主導地位而變得更均勻。具有所需特性的細胞也可以通過克隆，從培養物中選出。

Ⅱ 單克隆抗體是怎麼制備的

單克隆抗體是由單一B細胞克隆產生的高度均一、僅針對某一特定抗原表位的抗體。通常採用雜交瘤技術來制備，雜交瘤（hybridoma）抗體技術是在細胞融合技術的基礎上，將具有分泌特異性抗體能力的致敏B細胞和具有無限繁殖能力的骨髓瘤細胞融合為B細胞雜交瘤。

用具備這種特性的單個雜交瘤細胞培養成細胞群，可制備針對一種抗原表位的特異性抗體，即單克隆抗體。

單克隆抗體是人工制備的雜交瘤細胞生產的，雜交瘤細胞是由一個經抗原激活後的B細胞與一個骨髓瘤細胞融合形成。單克隆抗體優點：純度高，靈敏度高，特異性強，交叉反應少，制備的成本低。缺點：對技術有一定的要求，而且通過抗原的化學處理很容易丟失表位。

Ⅲ 單克隆抗體的制備

單克隆抗體制備有兩種方法。
第一種方法是：增量培養法，即將雜交瘤細胞在體外培養，在培養液中分離單克隆抗體。該法需用特殊的儀器設備，一般應用無血清培養基，以利於單克隆抗體的濃縮和純化。
第二種也是最普遍採用的方法是小鼠腹腔接種法。選用BALB/c小鼠或其親代小鼠，先用降植烷或液體石蠟行小鼠腹腔注射，一周後將雜交瘤細胞接種到小鼠腹腔中去。通常在接種一周後即有明顯的腹水產生，每隻小鼠可收集5～10ml的腹水，有時甚至超過40ml。該法制備的腹水抗體含量高，每毫升可達數毫克甚至數十毫克水平。此外，腹水中的雜蛋白也較少，便於抗體的純化。接種細胞的數量應適當，一般為500000/鼠，可根據腹水生長情況適當增減。

Ⅳ 制備單克隆抗體用到的動物細胞工程技術手段有哪些

制備單克隆抗體用到的動物細胞工程技術手段有：
1.動物細胞融合技術
2.動物細胞培養技術

Ⅳ 單克隆抗體技術有哪些

細胞融合技術、體細胞核移植技術、動物細胞培養技術。
融合方法
同種細胞在培養時2個靠在一起的細胞自發合並，稱自發融合；異種間的細胞必須經誘導劑處理才能融合，稱誘發融合
細胞核移植方法
先在體外培養的體細胞中進行基因導入，篩選獲得帶轉基因的細胞。然後，將帶轉基因體細胞核移植到去掉細胞核的卵細胞中，生產重構胚胎。重構胚胎經移植到母體中，產生的仔畜百分之百是轉基因動物。
動物細胞培養技術的條件
無菌、無毒的環境。 營養 溫度和PH 氣體環境

Ⅵ 單克隆抗體在臨床上的應用

1．檢驗醫學診斷試劑 作為檢驗醫學實驗室的診斷試劑，單克隆抗體以其特異性強、純度高、均一性好等優點，廣泛應用於酶聯免疫吸附試驗、放射免疫分析、免疫組化和流式細胞儀等技術。並且單克隆抗體的應用，很大程度上促進了商品化試劑盒的發展。目前，應用單克隆抗體製作的商品化試劑盒廣泛應用於： ①病原微生物抗原、抗體的檢測； ②腫瘤抗原的檢測； ③免疫細胞及其亞群的的檢測； ④激素測定； ⑤細胞因子的測定。 單克隆抗體對抗原的識別，與多克隆抗體有很大的不同。不同試劑盒因使用的單克隆抗體不同，識別抗原的位點不同，導致檢測結果有一定差異。因此，標准化問題還需要進一步研究。 2．蛋白質的提純 單克隆抗體是親和層析中重要的配體。將單克隆抗體吸附在一個惰性的固相基質（如Speharose 2B、4B、6B等）上，並制備成層析柱。當樣品流經層析柱時，待分離的抗原可與固相的單克隆抗體發生特異性結合，其餘成分不能與之結合。將層析柱充分洗脫後，改變洗脫液的離子強度或pH，欲分離的抗原與抗體解離，收集洗脫液便可得到欲純化的抗原。 3． 腫瘤的導向治療和放射免疫顯像技術 將針對某一腫瘤抗原的單克隆抗體與化療葯物或放療物質連接，利用單克隆抗體的導向作用，將葯物或放療物質攜帶至靶器官，直接殺傷靶細胞，稱為腫瘤導向治療。另外，將放射性標記物與單克隆抗體連接，注入患者體內可進行放射免疫顯像，協助腫瘤的診斷。目前單克隆抗體主要為鼠源性抗體，異種動物血清可引起人體過敏反應。因此，制備人-人單克隆抗體或人源化抗體更為重要，但此方面仍未取得明顯進展。

Ⅶ 單克隆抗體制備過程中運用了什麼細胞工程技術

制備單克隆抗體主要涉及的細胞工程技術包括動物細胞培養、動物細胞融合技術等

Ⅷ 單克隆抗體技術的程序

(1) 抗原制備。制備單克隆抗體的免疫抗原，從純度上說雖不要求很高，但高純度的抗原使得到所需單抗的機會增加，同時可以減輕篩選的工作量。因此，免疫抗原是越純越好，應 根據所研究的抗原和實驗室的條件來決定。一般來說，抗原的來源有限，或性質不穩定，提純時易變性，或其免疫原性很強，或所需單抗是用於抗原不同組分的純化 或分析等，免疫用的抗原只需初步提純甚至不提純，但抗原中混雜物很多，特別是如果這些混雜物的免疫原性較強時，則必須對抗原進行純化。檢測用抗原可以是與 免疫抗原純度相同，也可是不同的純度，這主要決定於所用篩檢方法的種類及其特異性和敏感性。
(2) 免疫動物的選擇。根據所用的骨髓瘤細胞可選用小鼠和大鼠作為免疫動物。因為，所有的供雜交瘤技術用的小鼠骨髓瘤細胞系均來源於BALB/c小鼠，所有的大鼠骨髓瘤細胞都來 源於LOU/c大鼠，所以一般的雜交瘤生產都是用這兩種純系動物作為免疫動物。但是，有時為了特殊目的而需進行種間雜交，則可免疫其他動物。種間雜交瘤一 般分泌抗體的能力不穩定，因為染色體容易丟失。就小鼠而言，初次免疫時以8-12周齡為宜，雌性鼠較便於操作。
(3) 免疫程序的確定。免疫是單抗制備過程中的重要環節之一，其目的在於使B淋巴細胞在特異抗原刺激下分化、增殖，以利於細胞融合形成雜交細胞，並增加獲得分泌特異性抗體的雜交 瘤的機會。因此在設計免疫程序時，應考慮到抗原的性質和純度、抗原量、免疫途徑、免疫次數與間隔時間、佐劑的應用及動物對該抗原的應答能力等。沒有一個免 疫程序能適用於各種抗原。現用的免疫程序中多數是參照制備常規多克隆抗體的方法。表6-1列舉了目前常用的免疫程序。免疫途徑常用體內免疫法包括皮下注 射、腹腔或靜脈注射，也採用足墊、皮內、滴鼻或點眼。最後一次加強免疫多採用腹腔或靜脈注射，目前尤其推崇後者，因為可使抗原對脾細胞作用更迅速而充分。 在最後一次加強免疫後第3天取脾融合為好，許多實驗室的結果表明，初次免疫和再次免疫應答反應中，取脾細胞與骨髓瘤細胞融合，特異性雜交瘤的形成高峰分別為第4天和第22天，在初次免疫應答時獲得的雜交瘤主要分泌IgM抗體，再次免疫應答時獲得的雜交瘤主要分泌IgG抗 體。筆者體會陽性雜交瘤出現的高峰與小鼠血清抗體的滴度並無明顯的平行關系，且多在血清抗體高峰之前。因此，為達到最高的雜交瘤形成率需要有盡可能多的漿 母細胞，這在最後一次加強免疫後第3天取脾進行融合較適宜。已有人報道採用脾內免疫，可提高小鼠對抗原的免疫反應性，且節省時間，一般免疫3天後即可融合。 （1）雜交瘤細胞的凍存。在建立雜交瘤細胞的過程中，有時一次融合產生很多「陽性」孔，來不及對所有的雜交瘤細胞作進一步的工作，需要把其中一部分細胞凍存起來；另一方面，為了防 止實驗室可能發生的意外事故，如停電、污染、培養箱的溫度或CO2控制器失靈等給正在建立中的雜交瘤帶來災難，通常盡可能早地凍存一部分細胞作為種子，以 免遭到不測。在雜交瘤細胞建立以後，更需要凍存一大批，以備今後隨時取用。
（2）雜交瘤細胞的復甦。雜交瘤細胞、骨髓瘤細胞或其他細胞在液氮中保存，若無意外情況時，可保存數年至數十年。復甦時融解細胞速度要快，使之迅速通過最易受損的-5℃—0℃，以防細胞內形成冰晶引起細胞死亡。 ⑴ 單克隆性的確定 包括雜交瘤細胞的染色體分析、單抗免疫球蛋白重鏈和輕鏈類型的鑒定和單抗純度鑒定等。
⑵ 單抗理化特性的鑒定。從實用意義上說，單抗對溫度和PH變化的敏感性以及單抗的親合力都是理化特性鑒定的主要項目，它們可為單抗的使用和保存提供重要依據。
⑶ 單抗與相應抗原的反應性測定。單抗與相應抗原的反應性決定於它所識別的抗原表位，確定單抗針對的表位在抗原結構上的位置，是單抗特性鑒定的關鍵環節，同時，進一步分析這類表位的差別， 可正確評價單抗的特異性和交叉反應性。

Ⅸ 單克隆抗體是通過什麼技術制備的

細胞雜交技術，單克隆抗體就是將小鼠骨髓瘤細胞和小鼠脾細胞融合成一個細胞。

Ⅹ 單克隆抗體技術原理是什麼

單克隆抗體技術原理如下：
由單一B細胞克隆產生的高度均一、僅針對某一特定抗原表位的抗體，稱為單克隆抗體。通常採用雜交瘤技術來制備，雜交瘤（hybridoma）抗體技術是在細胞融合技術的基礎上，將具有分泌特異性抗體能力的致敏B細胞和具有無限繁殖能力的骨髓瘤細胞融合為B細胞雜交瘤。用具備這種特性的單個雜交瘤細胞培養成細胞群，可制備針對一種抗原表位的特異性抗體即單克隆抗體。
單克隆抗體技術可用於探討①蛋白質的精細結構；②淋巴細胞亞群的表面新抗原；③組織相容性抗原；④激素和葯物的放射免疫（或酶免疫）分析；⑤腫瘤的定位和分類；⑥純化微生物和寄生蟲抗原；⑦免疫治療和與葯物結合的免疫-化學療法 (「導彈」療法,利用單克隆抗體與靶細胞特異性結合，將葯物帶至病灶部位。因此，單克隆抗體可直接用於人類疾病的診斷、預防、治療以及免疫機制的研究，為人類惡性腫瘤的免疫診斷與免疫治療開辟了廣闊前景。