體外用什麼技術得到反轉錄產物

1. 分不清反轉錄和反轉錄PCR，希望能人幫我解釋一下

反轉錄是以RNA為模板,通過反轉錄酶,合成DNA的過程，是DNA生物合成的一種特殊方式。又稱為逆轉錄PCR。其原理是：提取組織或細胞中的總RNA，以其中的mRNA作為模板，採用Oligo(dT)或隨機引物利用逆轉錄酶反轉錄成cDNA。再以cDNA為模板進行PCR擴增，而獲得目的基因或檢測基因表達。RT-PCR使RNA檢測的靈敏性提高了幾個數量級，使一些極為微量RNA樣品分析成為可能。該技術主要用於：分析基因的轉錄產物、獲取目的基因、合成cDNA探針、構建RNA高效轉錄系統

2. 逆轉錄的原理及主要過程

原理：提取組織或細胞中的總RNA，以其中的mRNA作為模板，採用Oligo或隨機引物利用逆轉錄酶反轉錄成cDNA。再以cDNA為模板進行PCR擴增，而獲得目的基因或檢測基因表達。過程：在逆轉錄酶作用下以dNTP為底物，RNA為模板，tRNA為引物。

按5′→3′方向，合成一條與RNA模板互補的DNA單鏈。然後它與RNA模板形成RNA DNA雜交體，隨後又在反轉錄酶的作用下，水解掉RNA鏈，再以此DNA為模板合成第二條DNA。逆轉錄過程是病毒的復制形式之一，如RNA病毒中的逆轉錄病毒，DNA病毒中的嗜肝DNA病毒和花椰菜花葉病病毒的復制均需要經過逆轉錄。

逆轉錄過程在真核細胞中也同樣存在，例如逆轉座子和端粒DNA的延長均存在逆轉錄過程，需逆轉錄酶的催化。逆轉錄過程的揭示是分子生物學研究中的重大發現，是對中心法則的重要修正和補充。

人們通過體外模擬該過程，以樣本中提取的mRNA為模板，在逆轉錄酶的作用下，合成出互補的cDNA，構建cDNA文庫，並從中篩選特異的目的基因。該方法已成為基因工程技術中最常用的獲得目的基因的策略之一。

3. 基因工程反轉錄法和化學法是什麼

反轉錄是將rna反轉錄為dna，化學法是按照預定序列一個鹼基一個鹼基地進行核酸片段拼接合成

4. PCR技術是運用於鳥槍法和反轉錄法嗎

PCR技術 是用來體外合成DNA的技術而鳥槍法（直接獲取）反轉錄法都是獲取的方法，用這兩種方法獲取以後，可以用PCR技術擴增。

5. RT-PCR的原理是什麼有何用途

原理是：提取組織或細胞中的總RNA，以其中的mRNA作為模板，採用Oligo（dT）或隨機引物利用逆轉錄酶反轉錄成cDNA。再以cDNA為模板進行PCR擴增，而獲得目的基因或檢測基因表達。

該技術主要用於：分析基因的轉錄產物、獲取目的基因、合成cDNA探針、構建RNA高效轉錄系統。

RT- PCR（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction）即逆轉錄PCR，是將RNA的反轉錄（RT）和cDNA的聚合酶鏈式擴增（PCR）相結合的技術。

首先經反轉錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴增合成目的片段。RT-PCR技術靈敏而且用途廣泛，可用於檢測細胞中基因表達水平，細胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。

作為模板的RNA可以是總RNA、mRNA或體外轉錄的RNA產物。無論使用何種RNA，關鍵是確保RNA中無RNA酶和基因組DNA的污染。

用於反轉錄的引物可視實驗的具體情況選擇隨機引物、Oligo dT 及基因特異性引物中的一種。對於短的不具有發卡結構的真核細胞mRNA，三種都可。

(5)體外用什麼技術得到反轉錄產物擴展閱讀

反轉錄酶的選擇

1、Money 鼠白血病病毒（MMLV）反轉錄酶：有強的聚合酶活性，RNA酶H活性相對較弱。最適作用溫度為37℃。

2、禽成髓細胞瘤病毒（AMV）反轉錄酶：有強的聚合酶活性和RNA酶H活性。最適作用溫度為42℃。

3、Thermus thermophilus、Thermus flavus等嗜熱微生物的熱穩定性反轉錄酶：在Mn存在下，允許高溫反轉錄RNA，以消除RNA模板的二級結構。

4、MMLV反轉錄酶的RNase H突變體：商品名為SuperScript 和SuperScriptⅡ。此種酶較其它酶能多將更大部分的RNA轉換成cDNA，這一特性允許從含二級結構的、低溫反轉錄很困難的mRNA模板合成較長cDNA。

6. 要在體外獲得大量反轉錄產物，常用什麼技術

PCR技術

7. dna分子切割後的片段分析

(1) 粘性末端和平末端 (2) 切割產生的DNA片段末端與EcoR Ⅰ切割產生的相同(3) 大腸桿菌DNA連接酶和T4DNA連接酶 (4) mRNA（或RNA） c DNA（或DNA） PCR(5) 噬菌體和動植物病毒 解析 分 析： 限制性內切酶切割DNA分子後可產生兩種類型的末端，即平末端和黏性末端。質粒運載體可以用EcoR Ⅰ切割，也可以用另一種限制酶切割，說明該酶切割產生的DNA片段末端與EcoR Ⅰ切割產生的相同。基因工程使用的DNA連接酶按來源分，可分為大腸桿菌DNA連接酶和T4DNA連接酶。反轉錄是質以mRNA為模版，逆轉錄形成DNA的過程，之後可採用PCR技術大量擴增DNA。基因工程的運載體有質粒、噬菌體和動植物病毒。 考點： 本題考查基因工程的相關知識。 點評： 本題意在考查考生的識記能力，屬於容易題。

8. 反轉錄的模板

DNA啊!PCR是以脫氧核糖核苷酸為原料的 而MRNA的組成是核糖核苷酸 原料都不同
而且PCR技術的原理是利用DNA雙鏈的原理.以MRNA為原料會得到雙鏈的RNA

9. 2012新課標卷第40（4）反轉錄作用的模板是MRNA，產物是CDNA。若要在體外獲得

DNA啊!PCR是以脫氧核糖核苷酸為原料的 而MRNA的組成是核糖核苷酸 原料都不同
而且PCR技術的原理是利用DNA雙鏈的原理。 以MRNA為原料會得到雙鏈的RNA