程序降溫盒細胞多久可以拿出來

1. 我把需要凍存的細胞放 在-20度忘記拿到-80，放了10多天，還有活的希望嗎BxPC-3

如果沒有凍存盒，應該是先放4度12h，-20度12h，然後-80度，一個月內液氮保存。你可以先復甦試試。

2. 程序降溫盒放室溫多久可以用

將程序降溫盒放入-80℃冰箱,冷凍4小時以上以達到凍存效果即可使用。

3. 用梯度降溫凍存盒降溫需要多長時間降到

異丙醇易揮發，並且容易吸收空氣中的水分，所以在冷凍細胞的過程中可以輔助實現緩慢降溫，直接從室溫放進-80可以達到近似於1度/分鍾。

4. 細胞培養的具體步驟和要求以及注意事項

一、細胞復甦

將凍存細胞從液氮中取出後，在37℃水浴鍋內不斷搖動促進其融化。移人15ml離心管中，加入10ml預熱的DMEM完全培養基，輕輕吹勻，離心，2000rpmX2min，棄上清液。

加入10ml DMEM培養基清洗，棄上清液。加入10ml DMEM完全培養基，輕輕吹打，接種於10cm盤中，在含5%CO2的細胞培養箱中培養。

二、細胞傳代

細胞密度達到80%~90%時．去培養基，10ml PBS清洗2次。加入3ml含0．25%EDTA的胰蛋白酶，放人細胞培養箱3min。加人1ml DMEM完全培養基終止胰酶消化，轉移至15ml離心管。

加入10ml PBS清洗細胞培養盤，轉移至15ml離心管，2000rpmX2min，棄上清液。再加入10ml PBS（經高壓滅菌，保存於40C），吹勻，吸取10微升進行計數，按照1×106/盤接種，在含5%CO2的細胞培養箱繼續培養。

三、細胞凍存

細胞密度達到80%～90%時，去培養基，10ml PBS清洗2次。加入3ml含0.25%EDTA的胰蛋白酶，放人細胞培養箱3min。加入lmlDMEM完全培養基終止胰酶消化，轉移至15ml離心管。加入10ml PBS清洗細胞培養盤，轉移至15ml離心管，2000rpmX2min，棄上清液。

加入lml凍存液（90%血清，10%DMSO），放入凍存盒內（盒內有異丙醇，以保證溫度降低的速度），立即放入一80℃冰箱內，過夜，第二天放入液氮中，可以保存至少兩年，如不放人液氮，可以保存三個月。

凍存液的配製：70%的完全培養基+20%FBS+10%DMSO.DMSO要慢慢滴加，邊滴邊搖。

注意事項

（1）進入細胞間開始細胞培養時，必須嚴格按照下列步驟操作：

①確定所有的細胞操作用的溶液和耗材都已經消毒並檢測沒有問題，不確定的溶液和耗材請勿使用，除非特殊情況，不要借用別人的溶液。

②確定衣服的袖口已經捲起或者白大褂的袖口已經扎緊。

③確定酒精燈內的酒精量，需要的話及時進行補充。

④確定所有需要用到的溶液和耗材都放在伸手可及的位置。為了方便單手開啟瓶蓋，實驗開始前可以把所有瓶蓋旋松。

⑤盡量不要直接傾倒溶液，除非瓶口沒有被燒壞。如果傾倒失敗，溶液粘在瓶口，請用噴過75%酒精的紙巾仔細清潔瓶口周圍（不要接觸到瓶口）後在火焰上簡單燒灼。

⑥操作時如果不能肯定所用的耗材是潔凈的，必須及時更換。

⑦實驗完畢及時收拾，保持工作區域清潔整齊，最後用75%酒精清潔檯面。

（2）細胞污染的預防

①實驗用品防止污染。細胞培養所用試劑、耗材、器材的清洗、消毒要徹底，各種溶液滅菌要仔細，並在無菌實驗檢測陰性後才能使用。操作室及剩餘的無菌器材要定期清潔、消毒、滅菌。

②操作過程防止污染。

③穿著容易起靜電或吸附灰塵的衣物必須更換為白大褂後才能進入細胞間。

④實驗開始前需要確定戴的手套沒有問題，只要接觸過生物安全櫃之外的物品，必須及時對手套進行消毒。

⑤進入細胞培養間後關好門，坐下來盡量少走動以免影響生物安全櫃的風簾。工作開始前要先用75%酒精棉球擦手和瓶蓋。事先要嚴格檢查所用的器材、溶液和細胞，不要把污染品或未經消毒的物品帶入無菌室內，更不能隨便使用，以免造成大規模污染。

⑥細胞操作時動作要輕，必須在火焰周圍無菌區內打開瓶口，並將瓶口放在火焰周圍簡單轉動燒灼，注意不要讓火焰把塑料瓶口燒化。

⑦實驗操作時生物安全櫃的隔板要盡可能放低，盡量減少談話，打噴嚏或咳嗽時絕對不能對著工作區，以免造成不必要的污染。

⑧瓶蓋應當倒放在遠離自己的地方，以避免瓶蓋被誤操作所污染。

⑨不要從敞開的容器口上方經過，以避免衣服上掉落不明物體對細胞的污染。

⑩實驗操作時要注意及時更換巴斯德吸管、移液槍槍頭和移液管，切勿一根管子做到底。一旦發現接觸了非潔凈或者無法確定潔凈的物品必須直接丟棄。實驗完畢應及時收拾，保持實驗室清潔整齊，最後用75%酒精清潔檯面。

（3）防止細胞交叉污染

①在進行多種細胞培養操作時，所用器具要嚴格區分，最好作上標記便於辨別。按順序進行操作，一次只處理一種細胞，多種細胞多種操作一起進行時易發生t昆亂。

②在進行換液或傳代操作時，粘有細胞的移液槍頭和移液管不要觸及試劑瓶瓶口，以免把細胞帶到培養基中污染其他細胞。

③所有細胞一旦購置，或從別處引入，或自己建立，必須及時保種凍存，一旦發生污染可重新復甦細胞，繼續培養。

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細胞培養（cell culture）是指在體外模擬體內環境（無菌、適宜溫度、酸鹼度和一定營養條件等），使之生存、生長、繁殖並維持主要結構和功能的一種方法。細胞培養也叫細胞克隆技術，在生物學中的正規名詞為細胞培養技術。

不論對於整個生物工程技術，還是其中之一的生物克隆技術來說，細胞培養都是一個必不可少的過程，細胞培養本身就是細胞的大規模克隆。細胞培養技術可以由一個細胞經過大量培養成為簡單的單細胞或極少分化的多細胞，這是克隆技術必不可少的環節，而且細胞培養本身就是細胞的克隆。

細胞培養技術是細胞生物學研究方法中重要和常用技術，通過細胞培養既可以獲得大量細胞，又可以藉此研究細胞的信號轉導、細胞的合成代謝、細胞的生長增殖等。

5. tct幾天出結果

一般醫院TCT在3-7天內出結果。

TCT宮頸防癌細胞學檢查對宮頸癌細胞的檢出率為100%，同時還能發現部分癌前病變，微生物感染如黴菌、滴蟲、病毒、衣原體等。所以TCT技術是應用於婦女宮頸癌篩查的一項先進的技術。

經過TCT薄層液基細胞學檢測後，如果發現宮頸細胞有異常，則需要進行陰道鏡檢查。在電子陰道鏡高倍放大40倍下，觀察宮頸癌前病變好發現表層的細微變化，對於宮頸癌及癌前病變的早期發現、早期診斷具有重要價值。

(5)程序降溫盒細胞多久可以拿出來擴展閱讀：

由於TCT檢查在取樣時已經將標本固定，所以在一定時間內都是穩定的，出結果時間的差異主要是由於一般醫院在等到一定量時集中監測。

TCT檢查是液基薄層細胞檢測的簡稱，採用液基薄層細胞檢測系統檢測宮頸細胞並進行細胞學分類診斷，它是目前國際上最先進的一種宮頸癌細胞學檢查技術，與傳統的宮頸刮片巴氏塗片檢查相比明顯提高了標本的滿意度及宮頸異常細胞檢出率。

6. 細胞放在凍存管里然後放程序降溫盒裡，但是沒有立刻放-80……

沒事啊，正常步驟就應該4攝氏度2h，-20攝氏度2h，-80攝氏度2h，然後放液氮罐。

7. 細胞凍存為什麼要進行程序性降溫

一般凍存盒中加入甘油的居多吧。丙二醇，異丙醇加入後，一方面防止由於溶液效應而使細胞脫水及蛋白質變性；另一方面在稍低於溶液冰點時人工強行誘導結冰，以免出現溶液過冷現象，防止結冰時釋放潛熱引起溫度回升，以及形成大的冰晶，減輕對細胞的損傷。在一步冷凍中．選用高濃度的滲透性保護劑組成的玻璃化溶液，在冷凍過程中，不發生結晶而形成玻璃樣固體，維持液態時的正常分子與離子分布，使細胞內發生玻璃化而起到保護作用。

8. 幹細胞實驗室程序降溫室工作制度

摘要 目的 建立實驗室管理使用規程，保證操作者正確使用。

9. 細胞凍存程序降溫盒哪裡有

我們實驗室學長用的是晶安生物的 國產的

10. 為什麼 程序降溫盒中異丙醇用5次就要更換

一般凍存盒中加入甘油的居多吧。丙二醇，異丙醇加入後，一方面防止由於溶液效應而使細胞脫水及蛋白質變性；另一方面在稍低於溶液冰點時人工強行誘導結冰，以免出現溶液過冷現象，防止結冰時釋放潛熱引起溫度回升